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E.coli DH5α Competent Cells
 
質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化方法
 
1. E.coli DH5α Competent Cells 使用前在冰上融化。
2. 輕微混勻，取100 μl裝入14 ml 圓底 tube中（BD Falcon 352059 或352057）。
   注意：不能劇烈振蕩混合細(xì)胞。
3. 加入DNA樣品（建議≤10 ng）。
4. 冰中放置30分鐘。
5. 42℃放置45秒。
6. 冰中放置1-2分鐘。
7. 添加SOC培養(yǎng)基（預(yù)先在37℃保溫）至終體積1 ml。
8. 37℃振蕩培養(yǎng)1小時(shí)（160-225 rpm）。
9. 取適量涂布于選擇培養(yǎng)基*。
10. 37℃過(guò)夜培養(yǎng)。
  *：直徑9cm的平板的涂布量不超過(guò)100 μl。如有需要，使用步驟7中的培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋。
 
注意事項(xiàng)
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80℃冷凍取出后請(qǐng)立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圓底 tubes (BD company Code: 352059 或 352057,等)，但效率可能會(huì)降低。
3. 當(dāng)使用100 μl感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，加入的高純度DNA樣品不要超過(guò)10 ng。否則轉(zhuǎn)化效率會(huì)降低。
4. 當(dāng)改變感受態(tài)細(xì)胞數(shù)量或tube類型時(shí)，適當(dāng)調(diào)整反應(yīng)條件。例如，當(dāng)使用1.5 ml microcentrifuge tubes時(shí)，42℃放置60秒而不是45秒。
5. L-broth 或φ b-broth可替代SOC培養(yǎng)基。此時(shí)，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低。
· L-broth : Ingredient per liter water
  Bacto tryptone 10 g
  Bacto yeast extract 5 g
  NaCl 5 g
   用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5并高壓滅菌。
· φ b-broth: Ingredient per liter water
  Bacto tryptone 20 g
  Bacto yeast extract 5 g
  MgSO4·7H2O 5 g
   用1 N KOH調(diào)整pH到7.5并高壓滅菌。
6. 當(dāng)加入X-Gal時(shí)，按照以下操作進(jìn)行：
 ·將 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到 agar培養(yǎng)基中。
7. DH5α可用于M13mp載體的復(fù)制。但由于其不攜帶F因子，因而不能形成菌斑。
8. 不建議將解凍的感受態(tài)細(xì)胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結(jié)不可避免，將細(xì)胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低至少一個(gè)數(shù)量級(jí)。