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PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2
 
PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2操作方法
 
1. 按下列組成配制RT-PCR反應(yīng)液。
試劑 使用量 終濃度
 PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2 μl     
 2×1 Step Buffer 25 μl     
 上游Primer（20 μM）*1（sense） 1 μl   0.4 μM  
 下游Primer（20 μM）*2 （anti-sense） 1 μl   0.4 μM  
 Template RNA
（or Positive Control RNA
 X μl*3
1 μl）		  
 RNase Free dH2O UP to 50 μl    
*1 Positive Control RNA時使用 F-1 Primer。
*2 Positive Control RNA時使用 R-1 Primer。
*3 Total RNA的使用量建議在1 μg以下。
 
2. 按以下條件進行RT-PCR反應(yīng)。
        Standard Condition
       （A）進行3 Step PCR 反應(yīng)時：
        50℃         30 min    
        94℃          2 min  
        94℃         30 sec 25-30 Cycles
        55-65℃         30 sec
        72℃         1 min/kb
 
       （B）進行2 Step PCR 反應(yīng)時：
        50℃         30 min    
        94℃          2 min  
        98℃         10 sec 25-30 Cycles
        68℃         1 min/kb
 
       Positive Control RNA反應(yīng)時：
        50℃         30 min    
        94℃          2 min  
        94℃         30 sec 30 Cycles
        60℃         30 sec
        72℃          1 min
        * Positive Control RNA反應(yīng)時可以確認到462 bp的PCR擴增產(chǎn)物