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PrimeScript™ RT Master Mix (Perfect Real Time)
 
反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)間和cDNA合成量的研討實(shí)驗(yàn)
 
[方法]
1. 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
試劑： PrimeScript RT Master Mix（Perfect Real Time）
模板： Human Placenta Total RNA 2 pg-2 μg
反應(yīng)體積： 20 μl
反應(yīng)條件： 37℃ 15、30、60 min反應(yīng)后85℃ 5 sec熱變性，4℃保存
 
2. Real Time PCR反應(yīng)
試劑： TB Green Premix Ex Taq II（Perfect Real Time）
模板： 上述反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液2 μl
反應(yīng)體積： 25 μl
Target Gene： ACTB
反應(yīng)條件： Thermal Cycler Dice Real Time System 標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件
 
[結(jié)果]
Real Time PCR擴(kuò)增曲線圖及標(biāo)準(zhǔn)曲線圖如下：
15 min  （紫色）
30 min  （紅色）
60 min  （黃色）
            擴(kuò)增曲線圖
 
 
            標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
15 min（紫色） Rsq: 0.999 Eff＝99％ Y＝-3.346LOG（X）+34.52
30 min（紅色） Rsq: 1.000 Eff＝98.9％ Y＝-3.349LOG（X）+34.46
60 min（黃色） Rsq: 0.999 Eff＝100.9％ Y＝-3.301LOG（X）+34.24
 
以上Real Time RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示，不同反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)間（15、30、60 min）在寬廣模板濃度范圍內(nèi)都可以得到同等的擴(kuò)增效率。