欧美成 人版在线_久久免视看国产_亚洲成l人在线观看线路_久久96热在精品国产网站

PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time)
 
反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)間和cDNA合成量的研討實(shí)驗(yàn)
 
1. 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
試劑： PrimeScript RT reagent Kit（Perfect Real Time）
模板： Mouse Liver Total RNA （2 pg-2 μg和滅菌水）
反應(yīng)體積： 20 μl
RT-Primer：  Random 6 mers
反應(yīng)條件： 37℃ 15、30、60 min反應(yīng)后85℃ 5 sec，4℃保存
 
2. Real Time PCR反應(yīng)
試劑： TB Green Premix Ex Taq （Perfect Real Time）
模板： 上述反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液2 μl
反應(yīng)體積： 25 μl
Target Gene： Actb
反應(yīng)條件： Thermal Cycler Dice Real Time System 標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件
 
3. Real Time PCR反應(yīng)結(jié)果
Real Time PCR擴(kuò)增曲線圖及標(biāo)準(zhǔn)曲線圖如下：
15 min  （紫色）
30 min  （紅色）
60 min  （茶色）
            擴(kuò)增曲線圖
 
            標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
15 min（紫色） Rsq: 0.999 Eff＝92.3％ Y＝-3.522LOG（X）+33.94
30 min（紅色） Rsq: 0.999 Eff＝93.3％ Y＝-3.495LOG（X）+34.61
60 min（茶色） Rsq: 0.999 Eff＝95.2％ Y＝-3.441LOG（X）+34.28
 
以上Real Time RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示，不同反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)間（15、30、60 min）在寬廣模板量范圍內(nèi)都可以得到同等的擴(kuò)增效率。