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| TaKaRa Taq™ |
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| TaKaRa Taq中E.coli基因組DNA的污染檢測(cè) |
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| 目前，市場(chǎng)上銷(xiāo)售的Taq DNA Polymerase幾乎均是經(jīng)過(guò)克隆轉(zhuǎn)化到E.coli中進(jìn)行表達(dá)后，分離提取得到的，那么就可能存在E.coli基因組DNA導(dǎo)致的內(nèi)源性污染。實(shí)驗(yàn)中使用E.coli來(lái)源的DNA混入量最低的高品質(zhì)的Taq DNA Polymerase尤為重要。 |
| 下面是為了檢測(cè)TaKaRa Taq和其他公司的Taq DNA Polymerase（標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別）的E.coli基因組DNA污染，針對(duì)ori區(qū)域進(jìn)行了巢式PCR擴(kuò)增例。 |
| 從圖2結(jié)果來(lái)看，TaKaRa Taq中沒(méi)有E.coli基因組DNA的擴(kuò)增片段，但其他公司的Taq DNA Polymerase（標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別）有ori區(qū)域（143 bp）的擴(kuò)增片段。通過(guò)泳道9的擴(kuò)增結(jié)果也可以證明Taq DNA Polymerase（標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別）中有E.coli的基因組DNA的擴(kuò)增。 |
| 從以下結(jié)果看出，TaKaRa Taq中的E.coli基因組DNA量很少，在巢式PCR擴(kuò)增檢測(cè)界限1-10 fg以下，證明TaKaRa Taq的品質(zhì)高于其他公司標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別的Taq DNA Polymerase。 |
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| 圖1：E. coli基因組的Ori區(qū)域和引物設(shè)計(jì) |
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| 圖2：2nd PCR反應(yīng)的結(jié)果 |
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| Lane |
Template量 |
| Lane 1 ： |
0 |
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negative test |
| Lane 2 ： |
0 |
| Lane 3 ： |
0 |
| Lane 4 ： |
0 |
| Lane 5 ： |
0 |
| Lane 6 ： |
1 pg |
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positive control |
| Lane 7 ： |
100 fg |
| Lane 8 ： |
10 fg |
| Lane 9 ： |
1 fg |
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| 擴(kuò)增區(qū)域： |
E. coli. ori region |
| 目的片段大?。?/span> |
2nd PCR 143bp |
| M： |
pHY Marker（Code No. 3404A/B）各8 μl電泳 |
| 泳道6-9作為陽(yáng)性對(duì)照，在1st PCR時(shí)分別加入1 pg、100 fg、10 fg 、1 fg E. coli JM109基因組DNA后進(jìn)行了巢式PCR。 |
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