欧美成 人版在线_久久免视看国产_亚洲成l人在线观看线路_久久96热在精品国产网站

TaKaRa LA Taq™
GC rich片段的擴(kuò)增例
 
 
    模板DNA為GC Rich序列時(shí)，使用以往的Taq DNA Polymerase通常難以進(jìn)行PCR擴(kuò)增。TaKaRa LA Taq和TaKaRa Ex Taq同以往的Taq DNA Polymerase相比，擴(kuò)增效率高，可對(duì)一般難以擴(kuò)增的DNA片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
 
    下面是GC含量為70%的DNA片段大小為3kbp的擴(kuò)增例。
 
    圖1對(duì)使用普通Taq DNA Polymerase和TaKaRa Ex Taq、TaKaRa LA PCR Kit Ver. 2的PCR擴(kuò)增進(jìn)行了比較。結(jié)果顯示普通Taq酶不能擴(kuò)增的GC Rich DNA片段使用TaKaRa Ex Taq、TaKaRa LA PCR Kit Ver. 2可進(jìn)行良好的PCR擴(kuò)增。
 
    GC Rich DNA片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，以7-deaza-dGTP替代dGTP有時(shí)可獲得良好的擴(kuò)增結(jié)果。如果想提高擴(kuò)增效率，將dGTP和7-deaza-dGTP（或dTTP）混合后再使用可獲得更好的擴(kuò)增結(jié)果（圖2）。 根據(jù)擴(kuò)增片段的種類可優(yōu)化dGTP和7-deaza-dGTP（或dTTP）的混合比例，建議進(jìn)行各種條件的研討決定最佳混合比例。
 
    * Primer序列
      M3-30 (將M3 Primer延長(zhǎng)的DNA序列)
         5'-CAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGT-3'
      RV-32 (將RV Primer延長(zhǎng)的DNA序列)
         5'-GATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGAC-3'
 
Template： VIII-5-pUC118
  （大小為3kbp的GC Rich DNA片段用Hindd III酶切后插入到pUC118中）
擴(kuò)增片段大?。?/span> 約 3 kbp
  （大小為3kbp的GC Rich DNA片段用Hindd III酶切后插入到pUC118中）
Template： VIII-5-pUC118
Primer： Custom long primer (30～32 mer)
  (各10 pmol/50 μl PCR)
dNTP Mixture： 以GTP替代7-deaza-dGTP
PCR條件： 94℃、1 min 30 cycles  
  68℃、5 min
                   (使用TaKaRa PCR Thermal Cycler 480)
 
 
        1% Agarose gel
        8 μl電泳
Lane 1： Taq 進(jìn)行PCR擴(kuò)增
Lane 2： TaKaRa Ex Taq
Lane 3： TaKaRa LA PCR Kit Ver. 2
Lane M1： λ-Hind III digest  
Lane M2： λ-EcoT14 I digest  
  圖1比較GC Rich DNA片段的PCR擴(kuò)增
 
 
        1% Agarose gel
        10 μl電泳
Lane 1： dGTP：dITP = 3：1 使用TaKaRa LA PCR Kit Ver. 2進(jìn)行PCR擴(kuò)增
Lane 2： dGTP：7-deaza-dGTP = 3：1
Lane 3： 7-deaza-dGTP
Lane 4： dGTP：dITP = 3：1 使用TaKaRa Ex Taq 進(jìn)行PCR擴(kuò)增
Lane 5： dGTP：7-deaza-dGTP = 3：1
Lane 6： 7-deaza-dGTP
Lane M： pHY Marker  
  圖2 dGTP和7-deaza-dGTP、dITP的混合比例與GC rich DNA擴(kuò)增片段的比較