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無標(biāo)題文檔
TaKaRa LA Taq™
易形成二級(jí)結(jié)構(gòu)DNA片段的擴(kuò)增例
 
 
    同GC Rich DNA片段相同，易形成二級(jí)結(jié)構(gòu)的模板使用以往的Taq酶也難以進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
 
    下面是以易形成二級(jí)結(jié)構(gòu)的DNA片段為模板，擴(kuò)增片段大小為2.7kbp的擴(kuò)增例。從圖1可以看出，使用以往的Taq酶有非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，而使用TaKaRa LA Taq （LA PCR Buffer II）可進(jìn)行良好的擴(kuò)增。
 
    沒有PCR擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí)，一般需進(jìn)行PCR條件研討及重新設(shè)計(jì)引物等，而使用高擴(kuò)增效率的TaKaRa LA Taq （LA PCR Buffer II）即可改善PCR擴(kuò)增反應(yīng)。強(qiáng)烈建議使用本酶。
 
Template： 易形成二級(jí)結(jié)構(gòu)的cDNA
  (用EcoR I酶切后插入到pBluescript II的cDNA)
擴(kuò)增片段大?。?/span> 約 2.7 kbp
  （大小為3kbp的GC Rich DNA片段用Hindd III酶切后插入到pUC118中）
Primer： Custom long primer (30～32 mer)(各10 pmol/50 μlPCR)
  引物序列與GC Rich DNA 片段的擴(kuò)增例實(shí)驗(yàn)使用的引物相同。
dNTP Mixture： 以7-deaza-dGTP替代dGTP
PCR條件： 94℃、1 min
  ↓
  98℃、20 sec 30 cycles  
  68℃、3 min
                   (使用TaKaRa PCR Thermal Cycler 480)
                   ※ DNA樣品由慶應(yīng)大學(xué)·分子生物學(xué)講座的高柳先生提供。
 
        1% Agarose gel
        8 μl電泳
Lane 1： Taq 進(jìn)行PCR擴(kuò)增
Lane 2： TaKaRa Ex Taq
Lane 3： TaKaRa LA PCR Kit Ver. 2
M： λ-Hind III digest  
     
         圖1 易形成二級(jí)結(jié)構(gòu)DNA片段的擴(kuò)增比較