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無標(biāo)題文檔
TaKaRa LA Taq™
使用LA PCR用Genome DNA Set的LA PCR
 
 
    利用LA PCR用Genome DNA Set中的各DNA和相應(yīng)的Primer set，使用TaKaRa LA Taq進(jìn)行了PCR擴(kuò)增
 
    ■ 配制PCR反應(yīng)液
 
  使用量 終濃度
  genome DNA   1 μl   人 genome：500 ng
  E.coli genome：100 ng
  10×LA PCR Buffer II (Mg2+ free)   5 μl   ×1
  25 mM MgCl2   5 μl   2.5 mM
  dNTP Mixture   8 μl   400 μM each
  Primer #1   1 μl   0.2 μM
  Primer #2   1 μl   0.2 μM
  TaKaRa LA Taq   0.5 μl   2.5 U/50 μl
  滅菌水   up to 50 μl  
 
    ■ 操作時(shí)的注意事項(xiàng)
    · 試劑盒中的試劑在室溫～37℃下完全融解后，充分吸打混合或上下顛倒混合。避免振蕩混合。10×LA PCR Buffer、TaKaRa LA Taq吸打混合時(shí)要注意防止氣泡產(chǎn)生及酶的失活。此外，試劑使用前在冰上保存。
    · 配制的反應(yīng)液在反應(yīng)前輕輕吸打混合。絕對(duì)不能振蕩混合。
 
    ■ PCR反應(yīng)條件【使用TaKaRa PCR Thermal Cycler MP】
 
                 94℃、1 min   1 cycles
                  98℃、10 sec 30 cycles
                  68℃、15 min
                  72℃、10 min   1 cycles
 
 
 
Lane 1：   λ-Hind III digest
Lane 2：   人基因組DNA的擴(kuò)增產(chǎn)物 8 μl（擴(kuò)增片段大?。?7.5 kbp）
Lane 3：   E.coli基因組DNA的擴(kuò)增產(chǎn)物 4 μl（擴(kuò)增片段大?。?0 kbp）
Lane 4：   λ-Hind III digest
 
 
         0.6% SeaKem Gold Agarose gel