| TaKaRa Ex Taq® | |
| Cool Start™法 | |
| 這種冷啟動法（Cool Start Method）可增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的特異性，減少PCR過程中的非特異性反應(yīng)，能得到良好的PCR結(jié)果。該方法操作簡單，無需專門的酶或附加試劑。 | |
| ■ Cool Start法操作過程 | |
| 1、 使用前將試劑置于冰上。 | |
| 2、 在冰上準(zhǔn)備反應(yīng)混合液*1，2。 *1：添加順序不影響結(jié)果。 *2：開始前在冰上放置30 min不會影響結(jié)果。 |
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| 3、 設(shè)定程序*3。 *3：Cool Start法不需要改變PCR條件。 |
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| 4、 將tube放入PCR儀后立即開始。 | |
| ■ Cool Start法和Hot Start法的比較 | |
| 對Cool Start法和Hot Start法進(jìn)行了比較。并對A公司推薦的Hot Start專用rTaq的使用方法也進(jìn)行了比較。 | |
| 從圖1可以看出，使用比Hot Start法更簡便的Cool Start法和TaKaRa Ex Taq可實現(xiàn)更高的擴(kuò)增效率和保真性。 | |
| 圖1 Cool Start法進(jìn)行PCR比較 | |
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| PCR反應(yīng)條件 | |
| 【使用TaKaRa Thermal Cycler480】 | |
| 94℃、1 min
60℃、1 min 40 cycles ↓ 60℃、10 min 3% NuSieve 3：1 agarose 各8 μl電泳 |
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| 模板： | HIV-1 positive control DNA和人基因組DNA的混合物 |
| Lane M ： | φX174-Hinc IIdigest |
| Lane 1, 4 ： | 室溫配制 |
| Lane 2, 5 ： | 使用AmpliWax的Hot Start法 |
| Lane 3 ： | 室溫配制 + 95℃、9 min pre-incuvation (A公司推薦的標(biāo)準(zhǔn)操作流程) |
| Lane 6 ： | Cool Start法 |
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