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| PrimeSTAR HS® DNA Polymerase |
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| 與其他公司High-Fidelity酶的品質(zhì)比較 |
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| 目前市場上銷售的PCR酶大部分是經(jīng)過克隆轉(zhuǎn)化到E.coli中進(jìn)行表達(dá)后，分離提取得到的，有可能發(fā)生內(nèi)源性E.coli基因組DNA的污染。因此純化時(shí)實(shí)驗(yàn)中使用E.coli來源的DNA混入量最低的高品質(zhì)的酶尤為重要。 |
| 下面是為了檢測PrimeSTAR HS DNA Polymerase和其他公司的High-Fidelity PCR酶的E.coli基因組DNA污染程度，在ori區(qū)域進(jìn)行了巢式PCR的驗(yàn)證例。 |
| 使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase時(shí)沒有確認(rèn)到E.coli基因組DNA的污染（下圖A）。而其他公司的High-Fidelity PCR酶在沒有添加模板的反應(yīng)體系中在ori區(qū)域確認(rèn)到143 bp的擴(kuò)增產(chǎn)物（下圖B）。從以上結(jié)果可以看出，PrimeSTAR HS DNA Polymerase中殘留的E.coli基因組DNA量不滿100 fg，質(zhì)量高于其他公司的High-Fidelity PCR酶。 |
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| (A) 使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase |
(B) 使用其他公司High-Fidelity PCR酶 |
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認(rèn)為Lane7、8的擴(kuò)增片段是殘留E.coli基因組DNA的擴(kuò)增片段 |
| 圖 E. coli ori區(qū)域的nested PCR比較 |
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| 擴(kuò)增區(qū)域： |
E. coli ori region |
| 擴(kuò)增片段大?。?/span> |
2nd PCR 143 bp |
| Lane M： |
100 bp DNA Ladder |
| Lane 1～6： |
(無模板DNA) |
| Lane 7： |
添加1 fg E. coli JM109基因組DNA |
| Lane 8： |
添加10 fg E. coli JM109基因組DNA |
| Lane 9： |
添加100 fg E. coli JM109基因組DNA |
| Lane 10： |
添加1 pg E. coli JM109基因組DNA |
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| 在1st PCR時(shí)，Lane7～10作為陽性對照分別添加1 fg、10 fg、100 fg、1 pg的E. coli JM109基因組DNA后進(jìn)行了nested PCR。 |
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