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| PrimeSTAR HS® DNA Polymerase |
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| 存在PCR反應(yīng)阻害物（SDS、腐殖酸）時(shí)與其他酶的活性比較 |
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| 以懷疑有SDS及腐殖酸污染的DNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase可有效進(jìn)行PCR擴(kuò)增。 |
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| （1）存在SDS時(shí)的酶活性 |
| 有時(shí)以含SDS的檢測(cè)樣品為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)。因PrimeSTAR HS DNA Polymerase不易受到SDS對(duì)PCR反應(yīng)的阻害，所以含SDS的檢測(cè)樣品也可放心使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase。 |
| 使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase和Taq DNA Polymerase（rTaq），在PCR反應(yīng)液中加入SDS后對(duì)SDS對(duì)PCR反應(yīng)的阻害進(jìn)行了研討。反應(yīng)體系以E. coli 基因組DNA為模板，擴(kuò)增1.5 kb DNA片段。 |
| 使用rTaq，反應(yīng)體系中的SDS終濃度為0.005%時(shí)，完全阻害PCR反應(yīng)。而使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase，即使反應(yīng)體系中的SDS終濃度為0.01%時(shí)也可擴(kuò)增。 |
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| （A）使用rTaq （B）使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase |
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| 圖 存在SDS時(shí)的PCR反應(yīng) |
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| Lane M： |
λ-Hind III digest |
| Lane 1： |
未添加SDS和模板 |
| Lane 2： |
SDS終濃度為0.01% |
| Lane 3： |
SDS終濃度為0.005% |
| Lane 4： |
SDS終濃度為0.002% |
| Lane 5： |
SDS終濃度為0.001% |
| Lane 6： |
未添加SDS |
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| （2）存在腐殖酸時(shí)的酶活性 |
| 近來(lái)研究經(jīng)常使用從土壤等環(huán)境樣品直接提取的DNA進(jìn)行分析。使用這種方法提取的DNA作為檢測(cè)樣品進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，必須注意要防止腐殖酸的污染。腐殖酸在土壤中分為2部分，一部分溶于堿，一部分不溶于酸，除土壤外海底堆積物等含有的紅褐色或黑褐色的有機(jī)物。即使微量的腐殖酸也對(duì)PCP反應(yīng)有很強(qiáng)阻害作用。而使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase即使存在腐殖酸也能發(fā)揮酶的活性，可檢測(cè)的檢測(cè)樣品范圍。將粗提的腐殖酸液（土壤提取液）*稀釋后加入到PCR反應(yīng)液中，使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase和rTaq對(duì)腐殖酸對(duì)PCR反應(yīng)的阻害進(jìn)行了研討。反應(yīng)體系以E. coli 基因組DNA為模板，擴(kuò)增1.5 kb DNA片段。 |
| 使用rTaq，即使添加0.01μl腐殖酸時(shí)也有很強(qiáng)的阻害作用。而使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase，添加0.01 μl腐殖酸時(shí)與未添加腐殖酸的PCR同樣可以進(jìn)行擴(kuò)增。因此，對(duì)于含SDS和腐殖酸污染的DNA模板，PrimeSTAR HS DNA Polymerase也能有效擴(kuò)增。 |
| *：腐殖酸不是標(biāo)準(zhǔn)的試劑，是從土壤中用堿溶出后，經(jīng)酸溶液沉淀，再用堿溶液溶解獲得。原液A280＝10、A700＝0。 |
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（A）使用rTaq |
（B）使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase |
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| 圖 存在腐殖酸時(shí)的PCR反應(yīng) |
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| Lane M： |
λ-Hind III digest |
| Lane 1： |
未添加腐殖酸和模板 |
| Lane 2： |
腐殖酸溶液添加量0.1 μl |
| Lane 3： |
腐殖酸溶液添加量0.01 μl |
| Lane 4： |
腐殖酸溶液添加量0.001 μl |
| Lane 5： |
腐殖酸溶液添加量0.0001 μl |
| Lane 6： |
未添加腐殖酸 |
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