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PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase
最適參數(shù)的設定
 
   為了發(fā)揮PrimeSTAR GXL DNA Polymerase的最大性能、獲得良好的PCR擴增結果，有必要按照最適參數(shù)進行設定。
（1）Primer的設計
   引物最好利用專業(yè)引物設計軟件進行設計（選擇最適的引物序列）,如OLIGO™ Primer Analysis Software (Molecular Biology Insights, Inc.)。
【擴增DNA片段≦10 kb時】
   一般引物長度為20-25 mer即可獲得良好的擴增，當引物的Tm值（使用操作流程中的公式計算）在55℃以上，或引物長度在25 mer以上，可進一步提高PCR反應的成功率。使用PrimeSTAR GXL DNA Polymerase時，避免使用含次黃嘌呤核苷堿基（Inosine）的引物。
【擴增DNA片段＞10 kb時】
   建議引物Tm值在65℃以上，引物長度為25-35 mer，設計引物時3’端的GC含量不要過高。
【靶基因GC rich時】
   建議引物的Tm值在60℃以上。
   NOTE：使用PrimeSTAR GXL DNA Polymerase時，避免使用含次黃嘌呤核苷堿基（Inosine）的引物。
 
（2）dNTP與Mg2＋
   由于dNTP具有螯合作用，dNTP濃度過高就會使實際參與反應的Mg2＋濃度下降。
   PrimeSTAR GXL DNA Polymerase配帶的5×PrimeSTAR GXL Buffer中含有的Mg2＋終濃度為1 mM、dNTP終濃度為200 μM each，是獲得良好擴增結果的最適反應體系。盡量避免變更dNTP在反應體系中的濃度。
   使用PrimeSTAR GXL DNA Polymerase時，不能用dUTP代替dTTP（使反應性能明顯下降）。
 
（3）模板
   建議使用的模板量如下(50 μl反應體系)：
  （普通擴增時） （擴增大片段DNA時）
 人基因組DNA 5 ng～500 ng 100 ng～500 ng
 大腸桿菌基因組DNA 100 pg～200 ng 10ng～200 ng
 λDNA 10 pg～10 ng 1 ng～10 ng
 cDNA 25 ng～750 ng 250 ng～750 ng
   * 亞硫酸氫鹽處理后的含有尿嘧啶的DNA為模板時不能使用本制品。