【方法】 |
以富含GC序列并容易發(fā)生堿基突變的Thermus thermophilus HB8 genomic DNA為模板,任選10個(gè)區(qū)域(各擴(kuò)增片段約500 bp),使用幾種不同的高保真DNA聚合酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增后,將各自PCR產(chǎn)物克隆至載體中,并對(duì)每種序列挑取復(fù)數(shù)的克隆進(jìn)行測序。以錯(cuò)配堿基數(shù)對(duì)總解析堿基數(shù)的比率來測定mutation frequency(突變頻率)。 |
【結(jié)果】 |
使用PrimeSTAR GXL DNA Polymerase擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物(486,923個(gè)堿基)的測序結(jié)果表明,有30個(gè)堿基發(fā)生了錯(cuò)配。從下圖可以看出,本酶的保真性優(yōu)于Pfu DNA Polymerase。 |
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