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Poly(A) Polymerase
 
在RNA上加上Poly(A)尾
 
1. 在微量離心管中配制下列反應(yīng)液。
 10×Poly(A) Polymerase Buffer  5 μl  
 MnCl2 5 μl  
 DTT 5 μl  
 0.1% BSA 10 μl  
 ATP 0.5 μl  
 RNA 10 μM  
 Poly(A) Polymerase（0.2～2 U/μl） 5 U  
 RNase free H2O up to 50 μl  
 
2. 37℃反應(yīng)30分鐘。
3. 加入50 μl（等量）的苯酚/氯仿/異戊醇（25：24：1），充分混勻。
4. 離心，取上層（水層）移至另一微量離心管中。
5. 加入50 μl（等量）的氯仿/異戊醇（24：1），充分混勻。
6. 離心，取上層（水層）移至另一微量離心管中。
7. 加入5 μl（1/10量）的3 M NaOAC（pH5.2）。
8. 加入125 μl（2.5倍量）的冷無(wú)水乙醇，-20℃放置30～60分鐘。
9. 離心回收沉淀，用70％的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。
10. 用于以后實(shí)驗(yàn)。
注）如需得到高純度的Poly(A)RNA時(shí)，可以在操作2.后用Oligo(dT)-Cellulose層析進(jìn)行純化。