| PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase | |
| 粗提樣品擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)例4：植物葉經(jīng)Plant DNA Isolation Reagent簡易制備提取液 | |
| 如MightyAmp DNA Polymerase（Code No.R071A/B、R076A/B）、PrimeSTAR GXL DNA Polymerase（Code No. R050A/B）。 | |
| Takara Bio的Plant DNA Isolation Reagent （Code No. 9194）是以氯化芐法為基礎(chǔ)構(gòu)建的Ready-to-use試劑盒，只需要簡單的操作就可以從植物材料中提取基因組DNA。使用該試劑盒簡易制備的DNA溶液，含有一定程度植物來源的PCR阻害物，使用該溶液進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時推薦使用TaKaRa Ex Taq Hot Start Version、MightyAmp DNA Polymerase、或PrimeSTAR GXL DNA Polymerase進(jìn)行反應(yīng)。 | |
| 方 法： | 以擬南芥幼葉、西紅柿幼葉、或者菠菜成熟葉提取的基因組DNA溶液為模板、使用各酶的推薦條件進(jìn)行PCR反應(yīng)、通過電泳確認(rèn)擴(kuò)增產(chǎn)物。 |
| 目的基因和 擴(kuò)增大小： |
擬南芥MERI5B基因（約1.0 kb）、西紅柿XET基因（約0.6 kb）、菠菜coxI基因（約0.5 kb）。 |
| 使用量： | 基因組DNA提取液原液及稀釋液各使用2 μl/25 μl反應(yīng)體系 Lane 1：原液 2：2倍稀釋液 3：5倍稀釋液 4：10倍稀釋液 5：20倍稀釋液 6：40倍稀釋液 M：250 bp DNA Ladder |
| （1）使用10～20 mg樣品進(jìn)行簡易制備的DNA溶液 | |
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| （2）100 mg樣品經(jīng)簡易制備，得到的含有較多阻害物質(zhì)的DNA溶液 | |
| 2-1. MightyAmp提高反應(yīng)性，2-2. 使用快速操作得到的改善（GXL）液 | |
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| ■ 植物來源簡易制備的基因組DNA為模板時 ◆ 重視反應(yīng)性的擴(kuò)增推薦使用TaKaRa Ex Taq Hot Start Version、MightyAmp DNA Polymerase 、TaKaRa Ex Taq HS能夠?qū)怂崃看蟮臉悠愤M(jìn)行良好的擴(kuò)增 植物來源的樣品含較多的PCR阻害物時，通過使用MightyAmp能夠進(jìn)一步提高反應(yīng)性。 ◆ 對于追求準(zhǔn)確性的擴(kuò)增推薦使用PrimeSTAR GXL DNA Polymerase 多數(shù)High Fidelity PCR酶用于核酸含量高的樣品擴(kuò)增時效果不是很理想，PrimeSTAR GXL能夠用于核酸含量更寬的樣品且能有效抵抗PCR阻害物質(zhì)的影響。 |
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