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| TaKaRa LA Taq™ |
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以人基因組DNA作為模板進(jìn)行LA PCR
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| 模板DNA： |
人基因組DNA |
| Target： |
β-globin cluster region和TPA gene region |
| 擴(kuò)增片段： |
17.5 kb β-globin cluster region |
| 21.5 kb β-globin cluster region |
| 27 kb TPA gene region |
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| ■ 反應(yīng)液組成 |
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反應(yīng)液加量 |
終濃度 |
| 人基因組DNA (500 ng/μl) |
1 μl |
500 ng/50 μl |
| 10 × LA PCR Buffer II (Mg2+ plus) |
5 μl |
［1×］ |
| dNTP Mixture |
8 μl |
各 400 μM each |
| Sense Primer (20 pmol/μl) |
0.5 μl |
0.2 μM |
| Antisense Primer (20 pmol/μl) |
0.5 μl |
0.2 μM |
| TaKaRa LA Taq |
0.5 μl |
2.5 U/50 μl |
| 滅菌蒸餾水 |
34.5 μl |
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| Total |
50 μl |
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| ·上層添加50μl礦物油 |
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■ PCR條件【使用TaKaRa PCR Thermal Cycler TP480】
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| 94℃ |
1 min |
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| ↓ |
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| 98℃ |
20 sec |
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14 cycles |
| 68℃ |
20 min |
| ↓ |
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| 98℃ |
20 sec |
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16 cycles |
| 68℃ |
20 min + 15 sec/cycle |
| ↓ |
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| 72℃ |
10 min |
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| ■ 結(jié)果 |
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| 各5 μl/電泳 |
| 0.4% Agarose gel |
| Lane 1： |
λ-Hindd III digest |
| Lane 2： |
17.5 kb |
| Lane 3： |
21.5 kb |
| Lane 4： |
27 kb |
| Lane 5： |
High Molecular Weight DNA Markers (BRL) |
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京公網(wǎng)安備 110114000405號