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易形成二級結(jié)構(gòu)DNA片段的擴增例
 
同GC rich DNA片段相同，易形成二級結(jié)構(gòu)的模板使用以往的Taq酶也難以進行PCR擴增。
 
下面是以易形成二級結(jié)構(gòu)的DNA片段為模板，擴增片段大小為2.7kb的擴增例。
從圖1可以看出，使用以往的Taq酶有非特異性擴增產(chǎn)物，而使用TaKaRa LA Taq （LA PCR Buffer II）可進行良好的擴增。
沒有PCR擴增產(chǎn)物時，一般需進行PCR條件研討及重新設計引物等，而使用高擴增效率的TaKaRa LA Taq （LA PCR Buffer II）即可改善PCR擴增反應。
強烈建議使用本酶。
 
Template：
 易形成二級結(jié)構(gòu)的cDNA
(用EcoR I酶切后插入到pBluescript II的cDNA)
擴增片段大?。?br /> 約2.7 kb
Primer*：
 Custom long primer (30～32 mer)
(各10 pmol/50 μlPCR) 引物序列與GC rich DNA 片段的擴增例實驗使用的引物相同
dNTP Mixture：
 以7-deaza-dGTP替代dGTP
PCR條件：
 94℃ 1 min
    ↓
  98℃ 20 sec.   30 cycles
  68℃ 3 min.  
(使用TaKaRa PCR Thermal Cycler 480)
 
DNA樣品由慶應大學?分子生物學講座的高柳先生提供