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腸出血性大腸桿菌O-157 的Vero毒素基因的檢出
 
【方法】
模板DNA：
     大腸桿菌O-157熱提取液
     control template EC3
目的基因：
     Vero毒素基因：171 bp
     control template EC3：685 bp
 
反應(yīng)液組份和PCR反應(yīng)條件：
使用TaKaRa Z-Taq
     · 1×Z-Taq Buffer
     · 200 μM dNTP Mixture
     · 400 nM Primer EVC-1
     · 400 nM Primer EVC-2
     · 2.5 U TaKaRa Z-Taq
     · control template EC3
     · O-157菌體熱提取液（檢測樣品）
 
     使用TaKaRa Thermal Cycler Personal（Fast mode）
98℃ 10秒 35 Cycles
55℃ 10秒
72℃ 7秒
     總反應(yīng)時間：44分鐘
 
使用TaKaRa Ex Taq
（使用O-157 One Shot PCR Screening Kit［Code No. RR102A］）
     · 1×Ex Taq Buffer
     · 200 μM dNTP Mixture
     · 200 nM Primer EVC-1
     · 200 nM Primer EVC-2
     · TaKaRa Ex Taq   2.5 U
     · control template EC3
     · O-157菌體熱提取液（檢測樣品）
 
     使用TaKaRa Thermal Cycler MP
94℃ 1分 35 Cycles
55℃ 1分
72℃ 1分
72℃ 10分
     總反應(yīng)時間：160分鐘
 
【結(jié)果】
 
使用TaKaRa Z-Taq，反應(yīng)時間（44分鐘）是目前為止使用O-157 One Shot PCR Screening Kit（約160分鐘）的1/4，且檢測結(jié)果相當(dāng)。因此，
從制備菌體熱提取液（檢測樣品）至電泳檢出僅需1.5小時。此外，10 cells/反應(yīng)體系可檢測出Vero毒素基因，維持著高檢測靈敏度。
由此可以看出，高速PCR用DNA聚合酶、TaKaRa Z-Taq可有效用于檢測樣品多、需要快速進(jìn)行結(jié)果判定的食品的病原微生物檢查及臨床檢查中。