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客戶實驗例5:使用In-Fusion® Cloning System構(gòu)建基因編輯敲除用供體載體(3個插入片段的In-Fusion克?。?/a>

 
【實驗內(nèi)容】
使用In-Fusion HD Cloning Kit,對3.0 kb 載體中的Puromycin抗性基因cassette(2.5 kb)、CRISRP/Cas9切斷部位的Right及Left arm(分別為0.7/0.6 kb)3個插入片段進(jìn)行克隆。圖中紅線顯示部位的限制酶切斷位點。
 
 
【結(jié)果】
用X-Gal/IPTG進(jìn)行藍(lán)白篩選,從得到的大量克隆中挑取10個白色克隆,通過限制酶及測序確認(rèn)位點時,根據(jù)載體種類的不同,載體1及載體2分別以9/10及7/10的高效率獲得目的重組載體(紅色序號列)。
 
 
 
【數(shù)據(jù)提供】:九州大學(xué)研究院醫(yī)學(xué)研究院 癌分子病態(tài)學(xué)講座
飯森 真人様(助教)
新美 晉一郎様(研究員)