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粗提樣品的擴(kuò)增例1:小鼠各組織的熱堿法提取液

MightyAmp DNA Polymerase(Code No. R071A/B)
 
方法
在5~10 mg小鼠尾、肝臟、脾臟、胸腺、腦中添加180 μl的50 mM NaOH,95℃孵育10分鐘后加入20 μl 的1 M Tris-HCl(pH8.0)進(jìn)行中和,獲得熱堿法提取液。分別以2.5 μl熱堿法提取液為模板(25 μl反應(yīng)體系),使用MightyAmp DNA Polymerase、A公司抗阻害物PCR酶、B公司抗阻害物PCR酶及TaKaRa Taq Hot Start Version(TaKaRa Taq HS)(Code No. R007A),在各自推薦的PCR反應(yīng)條件下對(duì)小鼠Tfrc 基因(2 kb)進(jìn)行了PCR擴(kuò)增。取3 μl反應(yīng)液進(jìn)行電泳,對(duì)反應(yīng)性能進(jìn)行了比較。
 
結(jié)果
使用TaKaRa Taq HS很少有PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,而使用MightyAmp DNA Polymerase可獲得良好的擴(kuò)增產(chǎn)物,與其他公司抗阻害物PCR酶相比,顯示擴(kuò)增效率更高。
 
 
Lane 1.   小鼠尾 MightyAmp的PCR反應(yīng)條件:98℃ 2 min.
2.   小鼠肝臟
3.   小鼠脾臟                            98℃ 10 sec   35 cycles
4.   小鼠胸腺                            68℃ 2 min  
5.   小鼠腦
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