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粗提樣品的擴(kuò)增例1:小鼠各組織的熱堿法提取液 |
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MightyAmp DNA Polymerase(Code No. R071A/B) |
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方法 |
在5~10 mg小鼠尾、肝臟、脾臟、胸腺、腦中添加180 μl的50 mM NaOH,95℃孵育10分鐘后加入20 μl 的1 M Tris-HCl(pH8.0)進(jìn)行中和,獲得熱堿法提取液。分別以2.5 μl熱堿法提取液為模板(25 μl反應(yīng)體系),使用MightyAmp DNA Polymerase、A公司抗阻害物PCR酶、B公司抗阻害物PCR酶及TaKaRa Taq Hot Start Version(TaKaRa Taq HS)(Code No. R007A),在各自推薦的PCR反應(yīng)條件下對(duì)小鼠Tfrc 基因(2 kb)進(jìn)行了PCR擴(kuò)增。取3 μl反應(yīng)液進(jìn)行電泳,對(duì)反應(yīng)性能進(jìn)行了比較。 |
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結(jié)果 |
使用TaKaRa Taq HS很少有PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,而使用MightyAmp DNA Polymerase可獲得良好的擴(kuò)增產(chǎn)物,與其他公司抗阻害物PCR酶相比,顯示擴(kuò)增效率更高。 |
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Lane 1. |
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小鼠尾 |
MightyAmp的PCR反應(yīng)條件:98℃ 2 min. |
2. |
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小鼠肝臟 |
↓
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3. |
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小鼠脾臟 |
98℃ 10 sec |
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35 cycles |
4. |
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小鼠胸腺 |
68℃ 2 min |
5. |
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小鼠腦 |
M. |
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pHY Marker |
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