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使用SapphireAmp® 的菌落PCR
 
SapphireAmp® Fast PCR Master Mix（Code No. RR350A/B）
 
對轉(zhuǎn)化了小鼠cDNA來源pUC118文庫（插入了0.5 kb～5 kb的DNA片段）的大腸桿菌菌落，利用菌落PCR對插入片段進行確認。
 
1. 配制反應管數(shù)＋α的Master Mix，分裝50 μl至PCR反應管。
例）進行8個檢測樣品的PCR反應
 
  1個反應   9個反應
SapphireAmp Fast PCR Master Mix（2×Premix） 25 μl   225 μl
M13 Primer M4（20 μM） 0.5 μl   4.5 μl
M13 Primer RV（20 μM） 0.5 μl   4.5 μl
滅菌水 24 μl   216 μl
 
2. 用滅菌槍頭的尖端挑取少量大腸桿菌菌落，懸浮于1. 的PCR反應管中的反應液后進行PCR反應。
 
PCR反應條件
                                       94℃　1 min.
                                        ↓
98℃　5 sec.   30 cycles  
55℃　5 sec.  
72℃　40 sec.  
 
（PCR反應所需時間：1小時11分鐘，使用TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice）
 
 
電泳結(jié)果
 
 
 
電泳結(jié)果可以確認到各種片段大小（0.5 kb～5 kb）的擴增產(chǎn)物。