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使用各公司PCR酶擴(kuò)增亞硫酸氫鹽處理后的DNA
 
【方法】
以亞硫酸氫鹽處理后的HeLa基因組DNA為模板，使用TaKaRa EpiTaq HS及其他公司的PCR酶進(jìn)行擴(kuò)增。
（處理后的HeLa基因組DNA 100 ng/50 μl反應(yīng)體系） 反應(yīng)按以下條件進(jìn)行。
 
亞硫酸氫鹽處理：MethylEasy Xceed Rapid DNA Bisulphite Modification Kit（Code No. ME002）
目的基因：CDKN2A、BRCA1 gene 上游的CpG 島區(qū)域
擴(kuò)增大?。?44 bp (CDKN2A)、1,017 bp (BRCA1)
 
＜反應(yīng)液組成＞
 
  使用量 終濃度
  亞硫酸氫鹽處理HeLa 基因組DNA（50 ng/μl） 2 μl 100 ng/50 μl
  10 × EpiTaq PCR Buffer (Mg2+ free) 5 μl 1×
  25 mM MgCl2 5 μl 2.5 mM
  dNTP Mixture（各2.5 mM） 6 μl 0.3 mM
  Sense Primer（20 μM） 1 μl 0.4 μM
  Antisense Primer（20 μM） 1 μl 0.4 μM
  TaKaRa EpiTaq HS（5 U/μl） 0.25 μl 1.25 U/50 μl
  滅菌水 up to 50 μl  
 
 
＜PCR條件＞
98℃　10 sec.   40 cycles  
55℃　30 sec.  
72℃　［30 sec.（144 bp）or 1 min.（1,017 bp）］  
 
（TaKaRa EpiTaq HS以外的其他試劑按各公司反應(yīng)條件進(jìn)行反應(yīng)）
 
 
【結(jié)果】