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以亞硫酸氫鹽修飾后的HeLa基因組DNA為模板進行PCR擴增反應(yīng)的實驗例
 
【方法】
1. 使用MethylEasy™ Xceed Rapid DNA Bisulphite Modification Kit（Code No.ME002）進行亞硫酸氫鹽修飾，然后進行PCR擴增反應(yīng)。
目的基因：CDH1、MLH1、BRCA1 gene上游的CpG島區(qū)域。
擴增片段大?。?53 bp (CDH1 )、297 bp (CDH1 )、136 bp (MLH1 )、292 bp (MLH1 )、613 bp (BRCA1 )、1,017 bp (BRCA1 )。
 
2. 按下列組成配制PCR反應(yīng)液。
試劑 使用量 終濃度
  亞硫酸氫鹽修飾后的HeLa基因組DNA （50 ng/μl） 2 μl 100 ng/50 μl
  10 × EpiTaq PCR Buffer (Mg2+ free) 5 μl 1×
  25 mM MgCl2 5 μl 2.5 mM
  dNTP Mixture（各2.5 mM） 6 μl 0.3 mM
  Sense Primer（20 μM） 1 μl 0.4 μM
  Antisense Primer（20 μM） 1 μl 0.4 μM
  TaKaRa EpiTaq HS（5 U/μl） 0.25 μl 1.25 U/50 μl
  滅菌水 up to 50 μl  
 
 
3. PCR反應(yīng)條件
98℃　10 sec.   30 cycles  
55℃　30 sec.  
72℃　30 sec. [30 sec./～500 bp、1 min./500 bp～]  
 
 
【結(jié)果】