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TaKaRa Taq Hot Start Version（Code No. R007A/B）的操作方法
 
 
1. 在冰上按下列組份配制反應液。除模板（檢測樣品）外，將下列組份根據反應所需份數配制混合液，分裝到反應管中，蓋上反應管蓋。
 
TaKaRa Taq Hot Start Version (5 U/μl) 0.25 μl
10×PCR Buffer (Mg2+ plus) 5 μl
dU plus dNTP Mixture*2 4 μl
MgCl2*2，3 1.5 μl
UNG*2，4 0.5 μl
Template < 500 ng
Primer 1 10～50 pmol  （終濃度0.2～1.0 μM）
Primer 2 10～50 pmol  （終濃度0.2～1.0 μM）
滅菌水 Up to 50 μl
 
*1 TaKaRa Taq Hot Start Version（Code No. R007A/B）中的附帶試劑。
*2 TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit中的試劑。
*3 因dUTP的濃度設定是dTTP的3倍，所以總體dNTP的濃度變高，雖然PCR Buffer中含有MgCl2，但為了保持MgCl2與dNTP量的平衡，要增加MgCl2濃度。使用10 × PCR Buffer (Mg+2 free) 時請?zhí)砑?.5 μl MgCl2。
*4 標準使用量：50 μl反應體系中添加1 U。
 
2. 模板（樣品）的添加。
向1.的分裝后反應液中添加模板（樣品），蓋緊反應管蓋。
 
3. 輕微離心，將反應管放置到PCR擴增儀中。
 
4. UNG處理及PCR擴增。
先進行UNG處理，然后使UNG失活。隨后按照PCR反應條件進行PCR擴增。根據擴增片段大小設定PCR反應條件。
 
<例如擴增1 kb DNA片段時>
           25℃?? 10 分鐘（UNG處理）*1
           95℃?? 2 分鐘（UNG的熱失活）*1
98℃ 10 sec. *2   30 Cycles  
55℃ 30 sec.  
72℃ 1 min. *3  
*1 UNG酶處理條件不變，與擴增片段大小無關。
*2 PCR變性條件請根據PCR擴增儀種類及反應管種類進行設定。一般設定為98℃ 5～10 秒或94℃ 20～30 秒。
*3 使用dUTP替代dTTP，有時PCR擴增效率會有所下降，當擴增效率不良時，請延長延伸時間。
 
5. 將PCR擴增產物進行凝膠電泳等分析。