| TaKaRa Taq™ HS PCR Kit, UNG plus的操作方法 | |||
| 1. 在冰上配制反應(yīng)液 除模板（檢測樣品）外，將下列組份根據(jù)反應(yīng)所需份數(shù)配制混合液，分裝到反應(yīng)管中，蓋上反應(yīng)管蓋。 |
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| TaKaRa Taq HS (5 U/μl) | 0.25 μl | ||
| 10×PCR Bufferfor UNG plus | 5 μl | ||
| dU plus dNTP Mixture | 4 μl | ||
| UNG | 0.5 μl | ||
| Template | < 500 ng | ||
| Primer 1 | 10～50 pmol （終濃度0.2～1.0 μM） | ||
| Primer 2 | 10～50 pmol （終濃度0.2～1.0 μM） | ||
| 滅菌水 | Up to 50 μl | ||
| 2. 模板（樣品）的添加。 向1.的分裝后反應(yīng)液中添加模板（樣品），蓋緊反應(yīng)管蓋。 |
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| 3. 輕微離心，將反應(yīng)管放置到PCR擴(kuò)增儀中。 | |||
| 4. UNG處理及PCR擴(kuò)增。 先進(jìn)行UNG處理，然后使UNG失活。隨后按照PCR反應(yīng)條件進(jìn)行PCR擴(kuò)增。根據(jù)擴(kuò)增片段大小設(shè)定PCR反應(yīng)條件。 |
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| <例如擴(kuò)增1 kb DNA片段時> | |||
| 25℃ 10 分鐘（UNG處理）*1 | |||
| 95℃ 2 分鐘（UNG的熱失活）*1 | |||
| 98℃ 10 sec. *2 |  |
30 Cycles | |
| 55℃ 30 sec. | |||
| 72℃ 1 min. *3 | |||
| *1 UNG酶處理?xiàng)l件不變，與擴(kuò)增片段大小無關(guān)。 *2 PCR變性條件請根據(jù)PCR擴(kuò)增儀種類及反應(yīng)管種類進(jìn)行設(shè)定。一般設(shè)定為98℃ 5～10 秒或94℃ 20～30 秒。 *3 使用dUTP替代dTTP，有時PCR擴(kuò)增效率會有所下降，當(dāng)擴(kuò)增效率不良時，請延長延伸時間。 |
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| 5. 將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳等分析。 | |||
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