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易形成二級結(jié)構(gòu)DNA片段的擴增例
 
與GC rich模板相同，易形成二級結(jié)構(gòu)的模板使用以往的Taq酶也經(jīng)常難以進行PCR擴增。
以下是以易形成二級結(jié)構(gòu)的DNA片段為模板，擴增2.7 kbDNA片段的擴增例。從圖1可以看出，使用以往的Taq酶只獲得了非特異性擴增產(chǎn)物，而使用TaKaRa LA Taq （LA PCR Buffer II）可進行很好地PCR擴增。
無PCR擴增產(chǎn)物時，一般進行循環(huán)圈數(shù)的研討及變更引物的設(shè)計等，而使用擴增效率優(yōu)良的TaKaRa LA Taq （LA PCR Buffer II）即可提高擴增效果，建議使用此酶。
 
Template 易形成二級結(jié)構(gòu)的cDNA
  (用EcoR I酶切后插入到pBluescript II的模板)
擴增片段大小 2.7 kb
Primer Custom long primer (30～32 mer)
  (各10 pmol/50 μl PCR)引物序列與Application實驗中(GC rich DNA片段的擴增例)相同
dNTP Mixture 以7-deaza-dGTP替代dGTP
 
PCR反應(yīng)條件
                    94℃ 1 min
                     ↓
98℃ 20 sec   30 cycles
68℃ 3 min  
使用TaKaRa PCR Thermal Cycler 480)
 
* 檢測樣品由慶應(yīng)大學(xué)·分子生物學(xué)學(xué)科的高柳先生提供。