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| 使用LA PCR用Genome DNA Set進行LA PCR反應 |
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| 利用LA PCR用Genome DNA Set，各DNA與相應的Primer set使用TaKaRa LA Taq進行了PCR擴增。 |
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| 反應液組成 |
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反應液量 |
終濃度 |
| genome DNA |
1 μl |
Human genome：500 ng
E.coli genome：100 ng |
| 10 × LA PCR Buffer II (Mg2+plus) |
5 μl |
1× |
| 25 mM MgCl2 |
5 μl |
2.5 mM |
| dNTP Mixture |
8 μl |
400 μM each |
| Primer #1 |
1 μl |
0.2 μM |
| Primer #2 |
1 μl |
0.2 μM |
| TaKaRa LA Taq |
0.5 μl |
2.5 U/50 μl |
| 滅菌水 |
up to 50 μl |
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| 操作時的注意事項 |
· 試劑盒內(nèi)的所有組份在室溫～37℃下完全融解后，用移液槍充分吸打混合或上下顛倒混合。盡量不要使用振蕩器。
混合10×LA PCR Buffer和TaKaRa LA Taq時，為了防止產(chǎn)生氣泡或酶失活，要注意緩慢混合。此外，各組份使用前請置于冰上保存。
· PCR反應液在PCR反應前輕輕吸打混合，不能使用振蕩器。 |
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| PCR反應條件【使用TaKaRa PCR Thermal Cycler MP】 |
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| 94℃、1 min |
1 cycle |
98℃、10 sec
68℃、15 min |
30 cycles |
| 72℃、10 min |
1 cycle |
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京公網(wǎng)安備 110114000405號