性能確認(1)- 擴增長度(Code No. RR014A) | ||||||||||||
以人心臟來源及HL60細胞來源的total RNA(1 μg/20 μl RT反應體系)為模板、使用Oligo dT Primer進行cDNA合成(42℃、30分鐘),取2 μl反轉(zhuǎn)錄反應液為模板添加到50 μl PCR反應體系中,對不同大小的目的基因進行擴增(相當于100 ng ?total RNA /50 μl PCR反應體系)。 | ||||||||||||
|
||||||||||||
PCR反應 | ||||||||||||
0.5~6 kb | 8~12 kb | |||||||||||
94℃ 1 min | 94℃ 1 min | |||||||||||
↓ |
↓ |
|||||||||||
94℃ 30 sec. | 98℃ 10 sec. | 30 cycles | ||||||||||
55℃ 30 sec. | 30 cycles | 68℃ 8 min. or 15 min. | ||||||||||
72℃ 1 min./kb | ||||||||||||
結(jié)果顯示,0.5~12 kb片段都得到了良好擴增 | ||||||||||||