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性能確認(1)- 擴增長度(Code No. RR014A)

 
以人心臟來源及HL60細胞來源的total RNA(1 μg/20 μl RT反應體系)為模板、使用Oligo dT Primer進行cDNA合成(42℃、30分鐘),取2 μl反轉(zhuǎn)錄反應液為模板添加到50 μl PCR反應體系中,對不同大小的目的基因進行擴增(相當于100 ng ?total RNA /50 μl PCR反應體系)。
 
目的基因 使用total RNA
 Dystrophin 人心臟來源
 Transferrin receptor(TFR) HL60細胞來源
 
PCR反應
 
0.5~6 kb       8~12 kb      
94℃ 1 min       94℃ 1 min      
                   ↓
                       ↓
   
94℃ 30 sec.     98℃ 10 sec.   30 cycles
55℃ 30 sec.   30 cycles 68℃ 8 min. or 15 min.  
72℃ 1 min./kb          
           
 
結(jié)果顯示,0.5~12 kb片段都得到了良好擴增