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擴(kuò)增片段長度確認(rèn)（2 Step RT-PCR）
PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit（Code No. R023A）
 
以人心臟來源的total RNA為模板，使用2 step RT-PCR對Dystrophin基因的不同長度的區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增。
 
【方法】
total RNA量為1 μg/20 μl反應(yīng)體系進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（使用oligo dT Primer），然后取5 μl反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液為模板添加到50 μl反應(yīng)體系（相當(dāng)于total RNA 250 ng /50 μl PCR反應(yīng)體系）中，按照下述條件進(jìn)行PCR反應(yīng)。
 
PCR條件
6 kb 以下     8 kb 以上    
98℃ 10 sec.   30 cycles 98℃ 10sec.   30 cycles
60 or 55℃ 15 sec.   68℃ 1 min./kb  
68℃ 1 min./kb        
 
【結(jié)果】
確認(rèn)長度至13.5 kb都能夠得到良好的擴(kuò)增。