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模板量使用范圍研討（2 Step RT-PCR）
 
【方法】
分別加入HL60 Cells total RNA 100 pg、1 ng、10 ng、100 ng、200 ng、500 ng、1 μg、2 μg、3μg作為模板，使用Oligo dT Primer進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。再以5 μl的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液作為模板，擴(kuò)增4 kb TFR基因片段。
 
PCR反應(yīng)條件
98℃ 10 sec.   30 cycles      
55℃ 15 sec.    
72℃ 4 min.        
 
【結(jié)果】
高達(dá)3 μg total RNA的RT反應(yīng)（20 μl的反轉(zhuǎn)錄體系）中，TFR基因得到了良好的擴(kuò)增，沒(méi)有擴(kuò)增抑制。
當(dāng)20 μl RT反應(yīng)液中的total RNA加量為6 μg時(shí)，延伸時(shí)間可設(shè)置為2 min./kb進(jìn)行PCR反應(yīng)。