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長鏈mRNA（約12 kb）的擴增
 
樣品RNA：人心臟來源mRNA
target：Dystrophin
擴增大小：12 kb
 
A. 反轉錄反應
1. 按下表所示制備反應液。
 
試劑 使用量 終濃度
 MgCl2 2 μl 5 mM
 10 × RNA PCR Buffer 1 μl 1 ×
 RNase Free dH2O 4.5 μl  
 dNTP Mixture（各10 mM） 1 μl 1 mM
 RNase Inhibitor 0.25 μl 1 U/μl
 AMV Reverse Transcriptase XL 0.5 μl 0.25 U/μl
 Random 9 mers 0.5 μl 2.5 μM
 人心臟來源mRNA 0.25 μl 0.25 μg
 Total 10 μl/sample  
 
2.配好后的反應管置于Thermal Cycler中，按以下程序進行反應。
 
 (30℃、10 min) 1 cycle
 42℃、50 min
 70℃、15 min
 
B. PCR
1. 按下表所示制備反應液。
 
試劑 使用量 終濃度
 MgCl2 3 μl 2.5 mM
 10×LA PCR Buffer II（Mg+2 Free） 4 μl 1 ×
 滅菌水 31.75 μl  
 TaKaRa LA Taq 0.25 μl 12.5 U/50 μl
 sense primer和antisense primer 各0.5 μl 各0.2 μM
 Total 40 μl/sample  
 
2. 取40 μl 1. 的反應液加入到A. -2. 反轉錄結束的反應管中。
 
3. 混和均勻后將反應管置于Thermal Cycler中，按下述程序進行反應。
 
 94℃、30 sec 30 cycles
 65℃、15 min
 
4. 反應結束后、取部分反應液（5 μl）進行電泳確認。能夠確認得到目的片段（12 kb）。