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| 人培養(yǎng)細胞HL60株來源的total RNA為模板的RT-PCR
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| ■ 方法 |
| 模板：人培養(yǎng)細胞HL60株來源的total RNA |
| 擴增大?。杭s 1 kb、約 2 kb、約 4.4 kb |
| target：Transferrin receptor |
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| 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液的制備 |
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| 試劑 |
使用量 |
| 2×Bca 1st Buffer |
10 μl |
| MgSO4 (25 mM) |
4 μl |
| dNTP Mixture（10 mM） |
1 μl |
| RNase Inhibitor |
0.5 μl |
| BcaBEST polymerase |
1 μl |
| Oligo dT Primer |
1 μl |
| HL60來源 total RNA（1μg/μl） |
1 μl |
| RNase Free dH2O |
1.5 μl |
| Total |
10 μl/sample |
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| 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件 |
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| 65℃ |
1 min |
1 cycle |
| 30℃ |
5 min |
| ↓gradient |
15 min |
| 65℃ |
30 min |
| 98℃ |
5 min |
| 5℃ |
5 min |
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| PCR反應(yīng) |
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| 試劑 |
使用量 |
| 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液 |
20 μl |
| MgSO4 (25 mM) |
6 μl |
| 5 × Bca 2nd Buffer |
16 μl |
| Bca-Optimized Taq |
0.5 μl |
| 上游PCR引物（20 μM） |
1 μl |
下游PCR引物（20 μM) |
1 μl |
| 滅菌水 |
1 μl |
| RNase Free dH2O |
55.5 μl |
| Total |
100 μl |
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| PCR反應(yīng)條件 |
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| 94℃ |
30 sec |
30 cycles |
| 55℃ |
30 sec |
| 72℃ |
5 min |
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| ■ 結(jié)果 |
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京公網(wǎng)安備 110114000405號