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無標(biāo)題文檔
In-Fusion與其他公司的無縫克隆試劑對比有何不同?
 
· 陽性克隆率和克隆菌落數(shù)是衡量無縫克隆試劑的兩個重要參數(shù),雖說陽性克隆率的高低是決定無縫克隆成敗的關(guān)鍵,但克隆菌落數(shù)的多少也是無縫克隆實(shí)驗(yàn)成功的重要保障!
· In-Fusion無縫克隆試劑兼具陽性克隆率高和克隆菌落數(shù)多的特點(diǎn),無需反復(fù)酶切連接以及亞克隆操作,僅通過一步反應(yīng)即可在15 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)目的片段和載體的定向克隆,大大提高了克隆實(shí)驗(yàn)的效率和成功率。
· 市售的很多無縫克隆試劑的原理看似與In-Fusion相同,但實(shí)際效果和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)卻有很大的不同。例如以下對比數(shù)據(jù):
 
■ 比較In-Fusion和A公司同類試劑盒的克隆效率(Takara Bio數(shù)據(jù))
進(jìn)行3個片段(MBP:1.1 kb、PROF12:0.7 kb、AcGFP1:0.7 kb)與2.7 kb線性載體連接的多片段克隆反應(yīng)。
 
  In-Fusion HD Cloning A公司產(chǎn)品
反應(yīng)條件 50℃,15分鐘 50℃,15分鐘 50℃,60分鐘
載體+目的片段 89個克隆 111個克隆 392個克隆
陰性對照(無目的片段) 1個克隆 39個克隆 78個克隆
陽性克隆獲得率 100%(26/26) 19%(5/26) 73%(19/26)
 
A公司產(chǎn)品陰性對照克隆數(shù)多,且目的克隆的獲得率低,說明使用該產(chǎn)品雖然整體克隆多,但空載體也多。對陽性克隆菌落進(jìn)行測序后發(fā)現(xiàn),In-Fusion方法得到的克隆序列基本都是正確的,使用A公司的產(chǎn)品錯誤較多(數(shù)據(jù)未顯示)。綜上可知,使用In-Fusion方法獲得含目的片段的克隆正確率更高。