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無(wú)標(biāo)題文檔
■ LAMP使用例
Nuclease-free water x μl
2X BcaBEST Buffer 12.5 μl
10X LAMP primer mix*1 2.5 μl
BcaBEST DNA Polymerase ver.2.0 (8 U/μl) 0.3 - 1 μl*2
Sample*3 e.g. 2 μl
Total 25 μl
60～65℃孵育30分鐘。*4
 
*1 FIP/BIP primers : 16 μM、F3/B3 primers : 2 μM、LoopF/B primers : 8 μM
*1、2、4 根據(jù)目的基因和引物的序列優(yōu)化反應(yīng)體系，包括引物和酶的濃度，以及反應(yīng)溫度和時(shí)間。高濃度的酶會(huì)減少檢測(cè)（擴(kuò)增）時(shí)間，但是有增加非特異性擴(kuò)增的風(fēng)險(xiǎn)。強(qiáng)烈建議加入無(wú)模板的對(duì)照反應(yīng)，以確保反應(yīng)結(jié)果的特異性。
*3 為了防止在制備過(guò)程中發(fā)生非特異性反應(yīng)，樣品應(yīng)該最后添加。如果以RNA為模板，添加Reverse Transcriptase XL（AMV）（5 U/μl）至終濃度為0.04 U/μl。
 
注意：反應(yīng)產(chǎn)物的檢測(cè)有多種方法，例如肉眼觀察顏色指示反應(yīng)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀做熒光檢測(cè)等?？筛鶕?jù)您的實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的方法。