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不同IVT反應溫度下的mRNA產量、蛋白表達水平比較

 
實驗方法:使用PrimeCap T7 RNA Polymerase (low dsRNA)(Code No. 2560A)或T7 RNA Polymerase ver.2.0(Code No. 2541A)和4 mM的CleanCap Reagent AG (TriLink)在不同溫度條件下(37、42、47、52℃)進行IVT反應,合成FLuc mRNA,并將合成的mRNA(各200 ng)進行瓊脂糖凝膠電泳。此外,將合成的mRNA轉染HEK293T細胞,通過FLuc重組測定法測量細胞中的蛋白表達水平。
 
 
結果顯示,2560A在52℃的溫度下仍能保持mRNA的產量,且具有耐熱性。雖然合成的mRNA在電泳上沒有明顯差異,但轉染后的蛋白質表達水平會隨著溫度的升高而下降。
由此結果說明,在超過37℃的IVT反應中,雖然酶持有耐熱性,但是會影響細胞內的蛋白質翻譯,因此,本產品的IVT反應溫度推薦為37℃。