| 使用例 | |
| 使用例-1 | |
| 將未加帽的RNA（5’-三磷酸RNA）制備成帶有Cap-0/ Cap-1的RNA。（兩步反應(yīng)） | |
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| 后續(xù)可以使用 mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase （Code No. 2470A）制備 Cap-1 RNA（可參照2470A說明書） |
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| 使用例-2 | |
| 將未加帽的RNA（5’-三磷酸RNA）制備成帶有Cap-1的RNA。（一步反應(yīng)） | |
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| *1 為了去除轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物5’端的二級結(jié)構(gòu)，在反應(yīng)前對RNA（5’-三 磷酸RNA）進(jìn)行熱變性，可以提高加帽效率。 (1) 取50 μg RNA，用RNase-free water將體積調(diào)至38 μl(制 備Cap-0 RNA）或34 μl（制備Cap-1 RNA）。 (2) 在65℃下熱變性5-10分鐘，然后立即在冰上放置5分鐘。 *2 SAM不穩(wěn)定。在反應(yīng)前，使用RNase-free water將32 mM原液進(jìn)行必要量的稀釋，稀釋液使用前冰上放置。 *3 如果RNA的加帽效率低，則增加酶的用量和/或延長孵育時(shí)間。 *4 可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大反應(yīng)體系。 *5 使用針對Faustovirus Capping Enzyme (S17)優(yōu)化的緩沖液， 而不是mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase (Code No. 2470A/B)提供的緩沖液。 |
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