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Takara有擔(dān)當(dāng)：提供完善的新冠病毒檢測(cè)體系和研討數(shù)據(jù)

一、WHO公布的新冠病毒檢測(cè)RT-qPCR Protocol

面對(duì)新冠病毒這個(gè)強(qiáng)大的敵人，全球生命科學(xué)研究人員在第一時(shí)間應(yīng)對(duì)，給出了針對(duì)新冠病毒核酸不同位點(diǎn)的不同檢測(cè)方案。

新冠病毒基因組擴(kuò)增子的相對(duì)位置

上表內(nèi)容翻譯自WHO網(wǎng)站https://www.who.int/emergencies/diseases/novel-coronavirus-2019/technical-guidance/laboratory-guidance

二、Takara探針?lè)∣ne Step RT-qPCR家族

Takara作為眾多檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)廠商的長(zhǎng)期合作伙伴，在春節(jié)期間全力以赴，迅速研發(fā)合成每種Protocol對(duì)應(yīng)的檢測(cè)引物、探針和標(biāo)準(zhǔn)品。中國(guó)疾病預(yù)防控制中心發(fā)表的文獻(xiàn)中使用了熒光定量PCR試劑One Step PrimeScript^™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time)（Code No. RR064），也因其高靈敏度、高擴(kuò)增效率和高擴(kuò)增特異性的特點(diǎn)，一直備受青睞。

在2019年Takara新推出的性能更優(yōu)、操作更簡(jiǎn)便的探針檢測(cè)一步法RT-qPCR試劑One Step PrimeScript^™ III RT-qPCR Mix（Code No. RR600A）和PrimeDirect^™ Probe RT-qPCR Mix（Code No. RR650A）也受到廣泛關(guān)注。

產(chǎn)品	Code No.	特點(diǎn)
One Step PrimeScript^™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time)	RR064A/B	probe法One Step RT-qPCR
One Step PrimeScript^™ III RT-qPCR Mix	RR600A/B	完全premix型probe法One Step RT-qPCR
One Step PrimeScript^™ III RT-qPCR Mix, with UNG	RR601A/B	RR600的UNG版本，防止假陽(yáng)性
PrimeDirect^™ Probe RT-qPCR Mix	RR650A/B	無(wú)需RNA純化，直接進(jìn)行probe法One Step RT-qPCR
PrimeDirect^™ Probe RT-qPCR Mix, with UNG	RR651A/B	RR650的UNG版本，防止假陽(yáng)性

三、使用Takara產(chǎn)品進(jìn)行新冠病毒檢測(cè)的研討結(jié)果

為了更好地服務(wù)科研人員，Takara研討了使用上述產(chǎn)品按照美國(guó) CDC Protocol對(duì)新冠病毒進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)果，驗(yàn)證了檢測(cè)靈敏度、擴(kuò)增情況、多重PCR的實(shí)驗(yàn)條件等內(nèi)容。

1. 下面是美國(guó)CDC檢測(cè)Protocol中的引物、探針和Control RNA序列

Oligo name	sequence (5' - 3')	5'	3'	base	Working Conc.	Tm(℃)
2019-nCoV_N1-F	GACCCCAAAATCAGCGAAAT			20	1.5 μM	61.2
2019-nCoV_N1-R	TCTGGTTACTGCCAGTTGAATCTG			24	1.5 μM	62.7
2019-nCoV_N1-P	ACCCCGCATTACGTTTGGTGGACC	FAM	BHQ1	24	0.375 μM	72.2
2019-nCoV_N2-F	TTACAAACATTGGCCGCAAA			20	1.5 μM	62.3
2019-nCoV_N2-R	GCGCGACATTCCGAAGAA			18	1.5 μM	63.4
2019-nCoV_N2-P	ACAATTTGCCCCCAGCGCTTCAG	FAM	BHQ1	23	0.375 μM	72
2019-nCoV_N3-F	GGGAGCCTTGAATACACCAAAA			22	1.5 μM	62.4
2019-nCoV_N3-R	TGTAGCACGATTGCAGCATTG			21	1.5 μM	63.2
2019-nCoV_N3-P	AYCACATTGGCACCCGCAATCCTG	FAM	BHQ1	24	0.375 μM	73.6
RP-F	AGATTTGGACCTGCGAGCG			19	1.5 μM	63.8
RP-R	GAGCGGCTGTCTCCACAAGT			20	1.5 μM	62.9
RP-P	TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG	FAM	BHQ1	23	0.375 μM	72

	Oligo name	sequence (5' - 3')	base
Control RNA	US-N1	AUGGACCCCAAAAUCAGCGAAAUGCACCCCGCAUUACGUUUGGUGGACCCUCA GAUUCAACUGGCAGUAACCAGAAUG	156
	US-N2	UGAUUACAAACAUUGGCCGCAAAUUGCACAAUUUGCCCCCAGCGCUUCAGCGU UCUUCGGAAUGUCGCGCAUU	146
	US-N3	UGAGGGAGCCUUGAAUACACCAAAAGAUCACAUUGGCACCCGCAAUCCTGCUAA CAAUGCUGCAAUCGUGCUACAACU	155

2. 下面是按照美國(guó)CDC檢測(cè)Protocol擴(kuò)增的結(jié)果

目的基因：N1 模板：Control RNA US-N1 5/50/500/5,000/50,000 copies

目的基因：N2 模板：Control RNA US-N2 5/50/500/5,000/50,000 copies

目的基因：N3 模板：Control RNA US-N3 5/50/500/5,000/50,000 copies

目的基因：RP(RNAse P)基因模板：HL60 RNA 10 pg/100 pg/1 ng/10 ng/100 ng

結(jié)論：
N1/N2/N3基因：50個(gè)拷貝能夠被穩(wěn)定檢出，5個(gè)拷貝不能夠被穩(wěn)定檢出。
內(nèi)對(duì)照RP基因在10 pg HL60 RNA中能夠被檢出。

3. 多重定量PCR的研討結(jié)果

使用PrimeDirect^™ Probe RT-qPCR Mix, with UNG（Code No.RR651）對(duì)N1基因+RP基因、N3基因+RP基因進(jìn)行多重定量PCR檢測(cè)。

1) 多重定量PCR的研討結(jié)果：

2) 擴(kuò)增曲線如下：

US-N3基因擴(kuò)增曲線更光滑，熒光信號(hào)更高，靈敏度為1～10拷貝。
RP+N3多重PCR結(jié)果穩(wěn)定。

除了上述結(jié)果外，為了檢測(cè)Takara產(chǎn)品對(duì)不同儀器的兼容性，我們還研討了上述多重定量PCR在Takara、Thermo Fisher Scientific、Bio-Rad的定量PCR儀器上的擴(kuò)增結(jié)果，RP+N3多重PCR無(wú)相互干擾，三種qPCR儀器均運(yùn)行穩(wěn)定，10 copies模板時(shí)Ct值≤38。

Takara還將陸續(xù)推出更多新冠病毒檢測(cè)的結(jié)果，包括使用PrimeDirect^™ Probe RT-qPCR Mix, with UNG（Code No.RR651）不提取RNA而直接進(jìn)行定量PCR的研討，敬請(qǐng)關(guān)注。

使用Takara探針檢測(cè)One Step RT-qPCR Kits，按照日本國(guó)立傳染病研究所在WHO發(fā)布的新冠病毒檢測(cè)Protocol的詳細(xì)實(shí)驗(yàn)條件和實(shí)驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果，請(qǐng)參考鏈接：
https://www.takara-bio.co.jp/goods/info/info144.htm

Takara愿與科研人員一起，用我們的專(zhuān)業(yè)專(zhuān)注，筑起對(duì)抗疫情的堅(jiān)強(qiáng)防線。

頁(yè)面更新：2020-03-18 09:21:31

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