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動(dòng)植物基因型鑒定，哪些PCR酶值得選購(gòu)？

基因分型是一種檢測(cè)個(gè)體基因型的技術(shù)，它的對(duì)象可以是病毒或細(xì)菌，幫助我們通過(guò)追蹤傳染源來(lái)控制病原體的傳播；可以是人，比如我們比較熟悉的骨髓/干細(xì)胞移植的HLA分型、腫瘤突變分型、DNA親子鑒定等等；也可以是實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常研究的動(dòng)植物，如鑒別基因敲除鼠等等。今天我們就來(lái)聊聊這其中的動(dòng)植物基因分型，如果您恰好在做這方面研究，或者對(duì)這個(gè)領(lǐng)域感興趣，不妨來(lái)了解一下。
轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物的基因型鑒定是該研究領(lǐng)域關(guān)鍵而且重要的環(huán)節(jié)之一。目前，常規(guī)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物鑒定主要涉及兩類(lèi)技術(shù)：第一種是以分子雜交技術(shù)為基礎(chǔ)的Southern blot和斑點(diǎn)雜交，第二種則是以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，發(fā)展起來(lái)的多種鑒定方法。Southern雜交雖然結(jié)果明確可靠，但是由于操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)、重現(xiàn)性差等缺點(diǎn)，并不太適用于環(huán)節(jié)眾多，工作量較大的前期篩選階段。而PCR技術(shù)的不斷發(fā)展，則大大簡(jiǎn)化了這一流程。我們以實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的模式動(dòng)物小鼠為例，常規(guī)PCR篩選鑒定步驟如下：

組織取材→提取模板DNA→PCR反應(yīng)→電泳→結(jié)果分析

這其中，PCR反應(yīng)作為當(dāng)之無(wú)愧的“C位”擔(dān)當(dāng)，地位舉足輕重。因此，選擇一款適合的PCR酶，就顯得尤為重要。
但是，現(xiàn)如今商品化的PCR酶種類(lèi)繁多，適用性也不盡相同，究竟哪些值得選購(gòu)？今天，我們就為大家種草兩款適用于動(dòng)植物基因型鑒定的PCR酶。

推薦一：MightyAmp系列直接PCR

種草理由：

■ 抑制劑耐受性高 ■ 無(wú)需DNA純化 ■ 操作簡(jiǎn)便，省時(shí)省力

Takara MightyAmp DNA聚合酶有很強(qiáng)的擴(kuò)增性能，對(duì)于使用普通PCR酶難以擴(kuò)增 (含有PCR阻害物) 的粗提樣品顯示很好的擴(kuò)增能力。無(wú)需DNA純化，可直接使用動(dòng)植物、血液、加工食品、FFPE、FTA卡等樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增，避免了由于多步樣品制備造成的基因組DNA的損失，節(jié)省了時(shí)間，降低了成本。助力動(dòng)植物基因分型，是您做直接PCR的理想選擇！

1. 跳過(guò)復(fù)雜的模板提取純化過(guò)程，可使用樣品或粗提品直接進(jìn)行擴(kuò)增

參考如下MightyAmp^™ Genotyping Kit（Code No. R074A）操作流程圖

2. 種類(lèi)繁多的樣品可以進(jìn)行直接PCR

3. 小鼠尾及動(dòng)植物等樣品的PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)例

4. MightyAmp系列制品一覽表

制品名稱(chēng)	概要	Code No.	包裝量
MightyAmp^™ Genotyping Kit	直接PCR擴(kuò)增試劑盒	R074A	200 次
MightyAmp^™DNA Polymerase Ver.2	Ver.2版本直接PCR酶	R071A	250 U
		R071B (A×4)	1,000 U
		R071Q	50 U
MightyAmp^™ DNA Polymerase Ver.3	Ver.3版本直接PCR酶，抗阻害性更強(qiáng)	R076A	250 U
MightyAmp^™ DNA Polymerase Ver.3	Ver.3版本直接PCR酶，抗阻害性更強(qiáng)	R076B (A×4)	1,000 U
Lysis Buffer for PCR	粗提裂解液制備試劑	9170A	20 ml
MightyPrep reagent for DNA		9182	20 ml
MightyPrep reagent for DNA		9182S	2 ml

推薦二：EmeraldAmp綠寶石系列Premix PCR酶

種草理由：

■ 操作簡(jiǎn)便，適用于大批量樣本 ■ 收量高 ■ Plus dye，可直接電泳

EmeraldAmp綠寶石系列是PCR反應(yīng)用各種試劑（酶、Buffer、dNTP Mixture等）的2倍濃度的預(yù)混型制品。使用本制品時(shí)，只需要在制品溶液中加入模板和引物便可進(jìn)行PCR反應(yīng)，簡(jiǎn)化了操作步驟。并且，本制品中已含有電泳時(shí)所必需的色素試劑（藍(lán)色和黃色色素），PCR反應(yīng)后可以直接進(jìn)行電泳。反應(yīng)液為鮮艷的綠色（Emerald Green），電泳時(shí)指示效果明顯，容易觀(guān)察樣品的電泳位置。

以EmeraldAmp^® MAX PCR Master Mix（Code No. RR320）為例，相比于Premix Taq/Ex Taq plus dye來(lái)說(shuō)，有如下優(yōu)勢(shì)：

① 制品性能更卓越，制品中使用了具有高擴(kuò)增性能的DNA聚合酶和最適Buffer，也適用于長(zhǎng)片段的擴(kuò)增。以人基因組DNA為模板可以擴(kuò)增15 kb的DNA片段。
② 性?xún)r(jià)比高，單次反應(yīng)價(jià)格較低。

1. 操作簡(jiǎn)便，可直接電泳

2.Technote：高通量篩選-通過(guò)PCR方法進(jìn)行基因分型

簡(jiǎn)介

什么情況下，適合使用傳統(tǒng)PCR作為高通量篩選方法？

Endpoint PCR是一種有效、可靠且成本較低的高通量篩選方法。先對(duì)大量樣品進(jìn)行常規(guī)PCR反應(yīng)后，用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析，應(yīng)用于基因分型或進(jìn)行常規(guī)的兩步法RT-PCR篩選標(biāo)記基因的表達(dá)等。

可能遇到的問(wèn)題

高效的工作流程如何能夠確保高通量PCR篩選項(xiàng)目的成功？

當(dāng)進(jìn)行數(shù)十個(gè)、數(shù)百個(gè)甚至數(shù)千個(gè)PCR反應(yīng)時(shí)，效率是至關(guān)重要的：工作效率的每一個(gè)改進(jìn)都會(huì)顯著節(jié)省時(shí)間。減少移液的步驟能盡可能減少污染和誤差的可能性，并可將重復(fù)性操作帶來(lái)的損失降到最低。簡(jiǎn)化篩選程序也能使不同的實(shí)驗(yàn)室人員之間實(shí)現(xiàn)更好的標(biāo)準(zhǔn)化操作，這對(duì)于擴(kuò)大篩選項(xiàng)目至關(guān)重要。

典型的Endpoint PCR篩查分析包括：

· 確定是否存在目標(biāo)序列（例如，轉(zhuǎn)基因序列）
· 等位基因測(cè)定（例如，可變重復(fù)序列、RFLP分析、插入和刪除）
· 在正向或反向基因篩選中識(shí)別突變體
· 利用RT-PCR技術(shù)篩選生物標(biāo)志物基因的表達(dá)

解決方案

EmeraldAmp綠寶石系列，優(yōu)化用于高通量PCR

Takara EmeraldAmp綠寶石系列PCR酶經(jīng)過(guò)優(yōu)化，能夠助力高效完成常規(guī)Endpoint PCR和PCR篩選項(xiàng)目（如對(duì)大量樣本進(jìn)行基因分型）工作，并且制品性能卓越、性?xún)r(jià)比高。該系列是PCR反應(yīng)用的DNA Polymerase、Buffer、dNTP Mixture的2倍濃度的混合物。使用時(shí)，只需在制品溶液中加入模板和引物便可進(jìn)行PCR反應(yīng)。PCR后的樣品可以直接上樣電泳、用于酶切、也可以方便克隆到T載體上。

點(diǎn)擊查看Technote詳情。

3. EmeraldAmp綠寶石系列制品一覽表

制品名稱(chēng)	概要	Code No.	包裝量
EmeraldAmp^® PCR Master Mix	Hot Start酶，適用于直接菌落PCR檢測(cè)插入片段，對(duì)GC Rich模板也能得到良好擴(kuò)增，以人基因組DNA為模板可以擴(kuò)增10 kb的DNA片段	RR300A	160 次
		RR300B（A×5）	800 次
		RR300Q	40 次
EmeraldAmp^® GT PCR Master Mix	適用于標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)，以人IGF2R為模板可以擴(kuò)增3.9 kb的DNA片段	RR310A	160 次
EmeraldAmp^® GT PCR Master Mix		RR310Q	40 次
EmeraldAmp^® MAX PCR Master Mix	適用于高收量及長(zhǎng)片段PCR反應(yīng)，以人IGF2R為模板可以擴(kuò)增15 kb的DNA片段	RR320A	160 次
EmeraldAmp^® MAX PCR Master Mix	適用于高收量及長(zhǎng)片段PCR反應(yīng)，以人IGF2R為模板可以擴(kuò)增15 kb的DNA片段	RR320Q	40 次
EmeraldAmp^® MAX HS PCR Master Mix	Hot Start酶，適用于高收量及長(zhǎng)片段PCR反應(yīng)，以人IGF2R為模板可以擴(kuò)增15kb的DNA片段	RR330A	160 次

頁(yè)面更新：2020-06-22 08:54:11

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