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| 技術(shù)控：如何使用智能手機(jī)10分鐘解鎖慢病毒滴度 |
| 近幾年來(lái)，重組慢病毒載體已經(jīng)成為一種非常通用的病毒基因?qū)牍ぞ?，從基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用逐漸被廣泛應(yīng)用。使用重組慢病毒載體，可以將外源基因非常高效地轉(zhuǎn)導(dǎo)至靶細(xì)胞中，實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定持續(xù)表達(dá)目的基因的效果。病毒滴度是慢病毒成功轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵因素。在這些應(yīng)用中，需要準(zhǔn)確地確定病毒載體的感染滴度，因?yàn)檫@將有助于提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率以及轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)的最終整合拷貝數(shù)。 不過(guò)，慢病毒滴度測(cè)定是一項(xiàng)費(fèi)時(shí)費(fèi)力的工作。根據(jù)所選擇的方法不同，時(shí)間跨度從數(shù)小時(shí)到2周不等，操作復(fù)雜程度也因選擇方法的不同而不同。為了進(jìn)一步簡(jiǎn)化病毒滴度測(cè)定操作過(guò)程，縮短檢測(cè)時(shí)間，Takara Bio公司開(kāi)發(fā)出了Lenti-X GoStix Plus快速檢測(cè)方法，能夠以智能手機(jī)作為數(shù)據(jù)讀取和分析工具，在十分鐘之內(nèi)定量檢測(cè)重組慢病毒滴度，而不需要購(gòu)買檢測(cè)儀器。 Lenti-X GoStix Plus這種智能化快速檢測(cè)方法，主要由Lenti-X GoStix Plus驗(yàn)毒棒和一款智能手機(jī)免費(fèi)應(yīng)用程序Lenti-X GoStix APP組成。Lenti-X GoStix Plus驗(yàn)毒棒可檢測(cè)慢病毒衣殼蛋白質(zhì)p24的存在，之后通過(guò)智能手機(jī)免費(fèi)應(yīng)用程序量化病毒滴度。使用這款智能手機(jī)應(yīng)用程序，可以對(duì)慢病毒p24蛋白質(zhì)的側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)進(jìn)行分析，在10分鐘內(nèi)提供檢測(cè)結(jié)果。 |
| Lenti-X GoStix Plus |
| ★ 構(gòu)思巧妙，基于側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)技術(shù)開(kāi)發(fā) |
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| 目前研究用重組慢病毒載體所包含的主要結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)，包括包膜蛋白質(zhì)、基質(zhì)蛋白質(zhì)、病毒核心蛋白質(zhì)。p24是構(gòu)成慢病毒粒子衣殼的一種主要結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)，由gag基因編碼表達(dá)(同時(shí)表達(dá)核衣殼蛋白質(zhì)p6和p7，基質(zhì)蛋白質(zhì)p17）。p24蛋白質(zhì)的表達(dá)水平可以直接反映出病毒感染滴度高低。 Lenti-X GoStix Plus驗(yàn)毒棒基于側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)技術(shù)開(kāi)發(fā)，可以快速檢測(cè)慢病毒上清液中的p24蛋白質(zhì)，通過(guò)測(cè)定慢病毒上清液中p24衣殼蛋白質(zhì)的含量來(lái)確定慢病毒滴度。驗(yàn)毒棒檢測(cè)框中Test指示條帶的出現(xiàn)，說(shuō)明樣本中含有足夠用量的慢病毒粒子，然后使用智能手機(jī)上的免費(fèi)應(yīng)用程序Lenti-X GoStix APP量化慢病毒滴度。 |
| 點(diǎn)擊觀看Lenti-X GoStix Plus操作視頻，2分鐘get操作要點(diǎn)。 |
| ★ 手段智能，以智能手機(jī)APP為量化手段 |
| 使用智能手機(jī)免費(fèi)應(yīng)用程序?qū)z測(cè)結(jié)果進(jìn)行量化，獲得準(zhǔn)確的慢病毒滴度。 這款專門(mén)量身定制的智能手機(jī)應(yīng)用程序，被命名為L(zhǎng)enti-X GoStix，使用免費(fèi)，在iOS和Android設(shè)備上都能運(yùn)行。使用這款應(yīng)用程序，可以同時(shí)運(yùn)行最多4個(gè)檢測(cè)，只需要對(duì)每個(gè)檢測(cè)進(jìn)行對(duì)應(yīng)命名，逐個(gè)掃描檢測(cè)結(jié)果即可。 使用Lenti-X GoStix Plus，不需要自己建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。Takara Bio事先為每個(gè)批次的Lenti-X GoStix Plus建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線，打開(kāi)Lenti-X GoStix APP并將移動(dòng)設(shè)備連接到互聯(lián)網(wǎng)，在輸入批號(hào)或者掃描批次二維碼后，會(huì)自動(dòng)加載指定批號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。這不僅可以縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間，降低實(shí)驗(yàn)成本，還可以更大限度地確保不同批次和不同實(shí)驗(yàn)間檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。Lenti-X GoStix APP可以記錄保存每次的檢測(cè)結(jié)果，為了避免數(shù)據(jù)丟失，檢測(cè)人員也可以通過(guò)電子郵件將檢測(cè)結(jié)果發(fā)送給自己便于保存記錄。 |
| （Lenti-X GoStix APP版本升級(jí)中，操作指導(dǎo)視頻敬請(qǐng)期待……） |
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| ★ 檢測(cè)快速，10分鐘完成滴度測(cè)定 |
| 使用Lenti-X GoStix Plus可以在10分鐘完成慢病毒滴度測(cè)定。傳統(tǒng)的滴度測(cè)定方法，如qPCR、ELISA或功能分析方法，不僅耗時(shí)長(zhǎng)而且操作繁瑣，不適用于監(jiān)測(cè)上清液以確定最佳的病毒收獲時(shí)間，也不適用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣本。Lenti-X GoStix Plus配合使用Lenti-X GoStix Plus驗(yàn)毒棒和Lenti-X GoStix APP，可以在10分鐘內(nèi)完成滴度測(cè)定。使用該應(yīng)用程序的結(jié)果記錄和郵件發(fā)送功能，還可以快速高效記錄多個(gè)時(shí)間點(diǎn)和多個(gè)樣本的檢測(cè)結(jié)果。 沒(méi)有對(duì)比就沒(méi)有傷害。來(lái)，感受下?！? |
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| 上圖比較了用Lenti-X-GoStix Plus和幾種常用經(jīng)典方法，測(cè)定慢病毒滴度所需要的時(shí)間（以小時(shí)為單位）。在這些檢測(cè)方法中，使用Lenti-X-GoStix Plus進(jìn)行檢測(cè)耗時(shí)最短。①Lenti-X-GoStix：本文所介紹的基于側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)技術(shù)的慢病毒上清液中p24的檢測(cè)方法；②qRT-PCR：通過(guò)qRT-PCR定量測(cè)定病毒RNA基因組；③ELISA：測(cè)定慢病毒衣殼蛋白質(zhì)p24的含量；④PCR：通過(guò)qPCR檢測(cè)整合DNA前病毒；⑤IFU（FACS）：通過(guò)流式細(xì)胞儀分析RFP（紅色熒光蛋白質(zhì)）/GFP（綠色熒光蛋白質(zhì)）陽(yáng)性細(xì)胞確定感染細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比；⑥IFU（篩選）：通過(guò)量化感染細(xì)胞群中耐藥細(xì)胞克隆的數(shù)量來(lái)確定感染單位。 |
| ★ 節(jié)約樣品，只需要20 μl上清液 |
| 使用Lenti-X-GoStix Plus測(cè)定慢病毒滴度，每次檢測(cè)只需要20 μl上清液作為檢測(cè)樣品，節(jié)約樣品用量。您只需將20 μl包裝細(xì)胞上清液，添加至GoStix驗(yàn)毒棒的上樣孔中，再滴加3滴緩沖液，等待5-10分鐘。Test指示條帶出現(xiàn)后，使用APP掃描檢測(cè)結(jié)果。 |
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| 如此看來(lái)，智能手機(jī)不僅滲透入了生活和工作的各個(gè)方面，讓我們的生活工作更加便捷高效。也在影響著我們的科研工作，讓我們可以突破常用傳統(tǒng)方法的限制，更加便捷快速地開(kāi)展科研工作。 |
| 更多慢病毒滴度測(cè)定方案 |
| 關(guān)于重組慢病毒滴度測(cè)定，除了Lenti-X GoStix Plus這款更快速、更智能的慢病毒滴度測(cè)定試劑盒之外，Takara Bio還可以提供經(jīng)典的ELISA和qRT-PCR檢測(cè)方法試劑盒。 |
| ● Lenti-X p24 Rapid Titer Kit |
| 通過(guò)ELISA方法特異性檢測(cè)重組慢病毒載體衣殼蛋白質(zhì)p24，通過(guò)與試劑盒中提供的p24標(biāo)準(zhǔn)品制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較，就可以獲得檢測(cè)樣品的病毒滴度。 · 通過(guò)簡(jiǎn)便的ELISA方法快速測(cè)定病毒滴度 · 4小時(shí)可完成病毒滴度測(cè)定 |
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| ● Lenti-X qRT-PCR Titration Kit |
| 該試劑盒通過(guò)qRT-PCR方法檢測(cè)上清液中的病毒基因組拷貝數(shù)，快速測(cè)定慢病毒滴度。將樣品和試劑盒中提供的標(biāo)準(zhǔn)品RNA進(jìn)行梯度稀釋，然后分別進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)后繪制曲線。通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線的Ct值比較，就可以獲得樣品所包含的病毒拷貝數(shù)。 · 通過(guò)一步qRT-PCR方法快速測(cè)定病毒滴度 · 4小時(shí)可完成病毒滴度測(cè)定 |
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| 點(diǎn)擊下方圖片，下載《Lenti-X™慢病毒系統(tǒng)和工具》，了解更多重組慢病毒基因?qū)胂到y(tǒng)和關(guān)聯(lián)工具。 |
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| 了解更多詳情和性能表現(xiàn)，請(qǐng)點(diǎn)擊：Lenti-X GoStix Plus |
頁(yè)面更新：2020-11-30 16:29:00
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