“天青色等煙雨，而我在等你”， |
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| 全球疫情肆虐期間，除了新冠疫情發(fā)展態(tài)勢(shì)，備受矚目的應(yīng)該就是疫苗的研發(fā)進(jìn)展了。 | ||||||||||||||
| 針對(duì)仍在持續(xù)的新冠肺炎疫情，全球科研機(jī)構(gòu)加速研發(fā)新冠肺炎疫苗。據(jù)了解，全球已有超過(guò)180個(gè)國(guó)家和地區(qū)做出承諾加入“新冠肺炎疫苗實(shí)施計(jì)劃”。涉及人口總量已占全球人口的90%。秉持人類衛(wèi)生健康共同體理念，我國(guó)也已加入“新冠肺炎疫苗實(shí)施計(jì)劃”。目前，我國(guó)已有4個(gè)新冠肺炎疫苗進(jìn)入Ⅲ期臨床試驗(yàn)階段并且進(jìn)展順利，其中之一是腺病毒載體疫苗。 |
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| 已進(jìn)入Ⅲ期臨床試驗(yàn)的腺病毒載體疫苗，采用了基因工程方法構(gòu)建，以復(fù)制缺陷型人5型腺病毒為載體，表達(dá)新型冠狀病毒S抗原，擬用于預(yù)防新型冠狀病毒感染引起的疾病。Takara具備完善的重組腺病毒載體系統(tǒng)，為腺病毒載體疫苗研發(fā)提供新型研究工具，為新冠疫苗研發(fā)助力。 | ||||||||||||||
| ■ 重組腺病毒載體系統(tǒng) | ||||||||||||||
| 使用強(qiáng)大克隆技術(shù)，省去穿梭質(zhì)粒，簡(jiǎn)化了重組腺病毒載體克隆步驟，加快了克隆速度。本系統(tǒng)基于人源5型腺病毒（Ad5）改造而成。由于腺病毒載體較大（∽34 kb），克隆難度較高，目前大多數(shù)腺病毒載體系統(tǒng)需要借助穿梭質(zhì)粒，使用復(fù)雜的克隆程序來(lái)克服克隆困難這一問(wèn)題。Takara Adeno-X Adenoviral System 3利用強(qiáng)大的In-Fusion HD克隆技術(shù)，不需要借助穿梭質(zhì)粒就可以將目的基因直接克隆至腺病毒載體中，就像常規(guī)質(zhì)粒構(gòu)建一樣簡(jiǎn)單快速。重要的是，將其它系統(tǒng)至少8天的克隆時(shí)間縮短至2-3天，同時(shí)確保克隆效率>90%。 另外，也可以提供四環(huán)素誘導(dǎo)表達(dá)型、無(wú)啟動(dòng)子通用型等重組腺病毒載體系統(tǒng)，適用于多種研究需求。 |
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| ■ 腺病毒滴度測(cè)定方案 | ||||||||||||||
| ·Adeno-X Rapid Titer Kit | ||||||||||||||
| 這是一種功能滴度測(cè)定方法，基于腺病毒六鄰體蛋白質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。該試劑盒中包含一種六鄰體蛋白質(zhì)特異性抗體，用于標(biāo)記感染細(xì)胞。六鄰體蛋白質(zhì)由腺病毒基因組編碼，是腺病毒衣殼的重要組成部分，為腺病毒復(fù)制所需要，但是它的表達(dá)需要依賴于E1基因產(chǎn)物。因此，像HEK 293這樣的E1基因反式互補(bǔ)細(xì)胞類型，可以用來(lái)測(cè)定腺病毒感染活性，原因是只有細(xì)胞被感染才能表達(dá)六鄰體蛋白質(zhì)。這種快速測(cè)定方法需要先花費(fèi)1-2小時(shí)建立體系，兩天后再花費(fèi)大約3小時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記、染色和計(jì)數(shù)。每個(gè)染色細(xì)胞對(duì)應(yīng)一個(gè)感染單位。這種檢測(cè)方法可與1型、2型、5型和6型人腺病毒相兼容。 我們已經(jīng)對(duì)基于5型人腺病毒的Adeno-X病毒進(jìn)行了驗(yàn)證，Adeno-X病毒由Takara Adeno-X腺病毒載體系統(tǒng)所制備。 |
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| ·Adeno-X qPCR Titration Kit | ||||||||||||||
| 這是一種使用定量PCR技術(shù)測(cè)定腺病毒滴度的方法，快速、簡(jiǎn)單、高效。這種測(cè)定方法可以用于檢測(cè)所有Ad5-based腺病毒載體，當(dāng)然也可以檢測(cè)使用Takara Adeno-X腺病毒載體系統(tǒng)所制備的重組腺病毒。結(jié)合使用了qPCR和TB Green，這樣就可以依據(jù)校準(zhǔn)的DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)確定腺病毒制劑（如粗裂解液或純化病毒粒子）中的病毒基因組拷貝數(shù)。這種測(cè)定方法只需要大約4小時(shí)就可得出檢測(cè)結(jié)果，而由于qPCR滴定花費(fèi)時(shí)間短，所以實(shí)驗(yàn)人員在收獲病毒的同一天，就可以使用經(jīng)過(guò)準(zhǔn)確滴定的病毒去感染目標(biāo)細(xì)胞。 | ||||||||||||||
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| ·Adeno-X GoStix | ||||||||||||||
| 這是一種即時(shí)靈敏 (～10 min)的腺病毒滴度測(cè)定方法，讓您可以迅速判斷出腺病毒是否制備完畢以做好使用準(zhǔn)備，也是確定擴(kuò)增后收獲病毒最佳時(shí)間的理想選擇。只需要將20 μl培養(yǎng)液上清添加至GoStix檢測(cè)板上樣孔中，隨后滴加4滴緩沖液，等待2-20分鐘，檢測(cè)板上的檢測(cè)窗口會(huì)出現(xiàn)一條帶。在上清液中檢測(cè)到的腺病毒數(shù)量與細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的腺病毒是密切相關(guān)的。每次測(cè)試都可以保證足夠高的靈敏度，使用少量病毒上清液就可以進(jìn)行檢測(cè)，也可以用于確保在腺病毒擴(kuò)增過(guò)程中獲得盡可能大的病毒收量（我們使用這些檢測(cè)板來(lái)確定從感染細(xì)胞中收獲病毒的最佳時(shí)間）。感染HEK293細(xì)胞后，每天只需要取20 μl上清液進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)窗口出現(xiàn)一條顏色很深的Test條帶，可以確保在產(chǎn)毒高峰時(shí)期收獲高滴度的腺病毒。 | ||||||||||||||
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| ■ 腺病毒純化方案 | ||||||||||||||
| 想要簡(jiǎn)便快速地純化腺病毒，可以選擇基于色譜的腺病毒純化系統(tǒng)。Takara開發(fā)的這種基于色譜的腺病毒純化方法，可以在1.5小時(shí)內(nèi)從感染細(xì)胞中純化擴(kuò)增后的腺病毒。 | ||||||||||||||
| 整個(gè)操作流程沒有超速離心步驟，而是使用了一種特別的選擇性結(jié)合腺病毒粒子的膜來(lái)進(jìn)行色譜純化。我們將膜裝在一個(gè)小型的一次性濾芯中，可安全安裝在標(biāo)準(zhǔn)尺寸的Luer-Lok注射器上。為了方便使用，注射器和過(guò)濾器組件都是預(yù)組裝好的，隨時(shí)可以使用。在過(guò)濾器和注射器之間還裝配了一個(gè)單向閥，省去了純化和洗滌過(guò)程中拆裝注射器的麻煩。含有腺病毒的培養(yǎng)液通過(guò)連接到單向閥的管子吸入注射器，然后通過(guò)推出過(guò)濾器進(jìn)行純化。當(dāng)含有病毒的培養(yǎng)液通過(guò)過(guò)濾器時(shí)，腺病毒粒子會(huì)吸附在膜上，將其從溶液中有效地分離出來(lái)。然后對(duì)結(jié)合在膜上病毒粒子進(jìn)行洗滌和洗脫就可以獲得高度純化的病毒粒子。 | ||||||||||||||
| 這種純化方法純化的病毒滴度和純度，與CsCl密度梯度離心法所獲得的效果是相當(dāng)?shù)模《玖Ｗ雍透腥締挝槐瓤傻椭?0:1。與CsCl密度梯度離心法不同的是，這種方法安全有效，不需要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的培訓(xùn)，也不需要昂貴的設(shè)備，只需要簡(jiǎn)單操作就可以穩(wěn)定獲得高產(chǎn)量的純化腺病毒。 | ||||||||||||||
| 對(duì)于大量病毒純化，我們還貼心準(zhǔn)備了大容量工具包。在這個(gè)工具包中，提供了注射泵來(lái)驅(qū)動(dòng)澄清的裂解產(chǎn)物通過(guò)三層過(guò)濾器。在結(jié)合、洗滌和洗脫過(guò)程中，注射泵恒定的壓力和流速非常有助于病毒回收。 | ||||||||||||||
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| 疫苗研發(fā)工作牽動(dòng)人心。除了已進(jìn)入Ⅲ期臨床試驗(yàn)的4個(gè)新冠疫苗之外，我國(guó)也還有其它重組蛋白疫苗、mRNA疫苗和減毒流感病毒載體疫苗正在抓緊開展Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗(yàn)。目前藥監(jiān)局批準(zhǔn)的第一個(gè)重組蛋白疫苗也正在組織三期臨床。這讓我們離新冠疫苗研發(fā)成功又多了一份希望。Takara不僅可以為腺病毒載體疫苗提供研究工具，也具有完備的重組蛋白疫苗上下游研究工具，為重組蛋白疫苗研究提供支持，請(qǐng)點(diǎn)擊文末鏈接查看“加快重組蛋白疫苗研發(fā)的創(chuàng)新工具”。 | ||||||||||||||
| “秋風(fēng)蕭瑟天氣涼，草木搖落露為霜”，天氣漸涼，秋意愈濃。秋冬季是呼吸道傳染病高發(fā)季節(jié)，存在新冠肺炎疫情與呼吸道傳染病疊加的風(fēng)險(xiǎn)。在此，Takara提醒大家，個(gè)人防護(hù)依舊不能松懈，應(yīng)該繼續(xù)保持良好衛(wèi)生習(xí)慣，做到戴口罩、勤洗手、保持社交距離，做好秋冬季新冠肺炎疫情防控工作。Takara愿與您“疫”路同行，并肩抗“疫”，共同推動(dòng)新冠肺炎疫苗的研發(fā)。 | ||||||||||||||
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加快重組蛋白疫苗研發(fā)的創(chuàng)新工具 | |||||||||||||
頁(yè)面更新：2020-10-23 11:00:52
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