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三大細(xì)節(jié)拿捏好，人iPS-肝分化成功率up up up！

肝臟的重要性不言而喻，在肝臟內(nèi)進(jìn)行的生化反應(yīng)有500多種，一旦肝功能紊亂，會導(dǎo)致一系列代謝疾病的發(fā)生。無論是從事肝臟疾病機(jī)理研究還是肝臟相關(guān)藥物代謝研究，具有預(yù)測功能的肝細(xì)胞模型都是必要的工具。

人iPS細(xì)胞分化的肝細(xì)胞與原代肝細(xì)胞功能相似，并保留供體的遺傳背景，是一種新型的肝細(xì)胞模型。其最大的亮點是由于iPS細(xì)胞可穩(wěn)健增殖，只要通過持續(xù)分化即可供應(yīng)相同遺傳背景的肝細(xì)胞，規(guī)避了人原代肝細(xì)胞供體材料有限、無法持續(xù)供應(yīng)的缺點。

Takara Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System（Y30055）是一款完整、高效、新手友好型的分化系統(tǒng)，可在三周內(nèi)生成具備功能特性的人iPS來源肝細(xì)胞。

來，上視頻！6分鐘，快速了解Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）！

細(xì)節(jié)的實質(zhì)是認(rèn)真的態(tài)度和科學(xué)的精神，奧秘全在細(xì)節(jié)處 Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System（Y30055）的使用說明書就有滿滿29頁，可以說是非常之詳細(xì)了！貼心小編已經(jīng)自覺化身課代表為大家劃好了重點，以下三大細(xì)節(jié)拿捏好，高效使用Takara肝分化系統(tǒng)，成功率up up up！

一、細(xì)胞計數(shù)

使用合適的接種密度是成功iPS-肝分化的關(guān)鍵，請務(wù)必要正確計數(shù)細(xì)胞。我們建議使用血球計數(shù)板。如果使用自動化細(xì)胞計數(shù)儀，需要同時在血球計數(shù)板中加入相同的細(xì)胞懸液來校驗自動計數(shù)的結(jié)果，從而對應(yīng)調(diào)整好自動計數(shù)儀的設(shè)置。
iPS-DE細(xì)胞分化階段，起始iPS細(xì)胞太稀疏將導(dǎo)致分化Day 4前大量細(xì)胞死亡；過密會導(dǎo)致分化過程中同質(zhì)性降低；推薦接種密度4.0x10⁴ cells/cm²。
DE-肝細(xì)胞分化階段，起始DE細(xì)胞太稀疏將導(dǎo)致獲得的肝細(xì)胞生存培養(yǎng)周期縮短和性能不佳，因為肝細(xì)胞生存和功能維持需要細(xì)胞間的接觸；如果過密，過剩的細(xì)胞將不會貼壁，在換液時會被移除；推薦接種密度1.2x10⁵ cells/cm²。

二、換液時間

iPS-DE細(xì)胞分化階段，每天大約在同一時間換液，盡量在上午10點至下午4點，確保持續(xù)為細(xì)胞提供新鮮的營養(yǎng)物質(zhì)和生長因子。DE-肝細(xì)胞分化階段，換液時間要求不那么苛刻，適當(dāng)延后10-12小時也可以。

三、覆蓋層(Overlay)

DE-肝細(xì)胞分化階段，非常重要的是覆蓋層(Overlay)的制備、形成和后續(xù)換液。
Day 14和Day 16換液時，需要確保Maturation Medium溫度在16℃ - 18℃。如果溫度過高，覆蓋層在接觸細(xì)胞前就會膠化和脫落，一個完整的覆蓋層就不會形成；溫度過低，細(xì)胞可能會收縮但是仍會恢復(fù)。
更換Maturation Medium 48h內(nèi)，不要再移動觸碰細(xì)胞。這就意味著Day 15和Day 17不要觀察細(xì)胞。因為如果移動細(xì)胞，很有可能形成分布不均勻的覆蓋層，這會顯著影響后續(xù)的分化。
Day 18及后續(xù)天數(shù)換液時，不要破壞覆蓋層。我們建議傾斜培養(yǎng)板，使用手動移液器（單孔、多孔）小心移除90%舊的培養(yǎng)基，沿著側(cè)壁小心添加新的培養(yǎng)基，參考以下示意圖。

附《Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）資料合集》，拿走拿走別客氣！

1. 操作說明：Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System User Manual

2. 技術(shù)資料：A simple and complete system to generate mature hepatocytes from various iPS cell sources

3. 技術(shù)資料：Next-generation human iPS cell-derived hepatocytes for metabolic disease modeling

4. 技術(shù)資料：Next-generation human iPS cell-derived hepatocytes for long-term drug metabolism studies

5. 應(yīng)用文獻(xiàn)：Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System citation list

頁面更新：2022-09-01 13:43:49

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