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產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

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無標(biāo)題文檔
#大型答疑現(xiàn)場# 二十二問Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)！
 
Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）提供了一個完整的、用戶友好的解決方案，可以實現(xiàn)在三周內(nèi)獲得功能性的人iPS來源肝細胞，這些分化獲得的人iPS-肝細胞表達充足的藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運蛋白，在長時間的培養(yǎng)過程中表現(xiàn)穩(wěn)定的功能特性，因此，可以替代原代肝細胞，作為新型的肝細胞模型來開展肝臟疾病研究和藥物代謝開發(fā)。另外，不同人iPS來源肝細胞，也可以更好的反映人類群體中的代謝多樣性。
 
Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量
Y30055 Cellartis® iPS Cell to Hepatocyte Differentiation Systemt 1 Kit
 
開講啦！
Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）介紹視頻，六分鐘，知其然！
 
答疑時間到！
Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）常見問題集，二十二問，知其所以然！
 
1. Cellartis® iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055) 與Cellartis® Definitive Endoderm Differentiation Kit with DEF-CS Culture System(Y30035) 和Cellartis® Hepatocyte Differentiation Kit (Y30050) 有什么不同？
Y30055=Y30035+Y30050，具體組分沒有區(qū)別，請按照實際需求整套或單獨購買。
 
2. 什么樣的多能干細胞可以作為肝分化起始？
Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）被證明對20多株多能干細胞均有效（參考以下文獻Asplund et al. 2016），Takara提供即用的人iPS細胞系，您也可以使用自己制備的多能干細胞作為分化起始。
 
Asplund, A. et al. One standardized differentiation procedure robustly generates homogenous hepatocyte cultures displaying metabolic diversity from a large panel of human pluripotent stem cells. Stem Cell Rev. 12, 90-104 (2016).
 
3. 是否需要單獨購買DEF-CS培養(yǎng)系統(tǒng)?
Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）包括DEF-CS 100 Culture System，即100 ml，足夠肝分化起始人iPS細胞的增殖和馴化。如需大量擴增培養(yǎng)，可選擇DEF-CS 500 Culture System（Y30010），為 500 ml。
 
4. 人iPS分化獲得的DE細胞純度為多少？最終分化獲得的干細胞純度為多少?
分化至第7天的DE細胞Sox-17平均陽性率為97%。分化至21天及之后的肝細胞HNF4α平均陽性率為94%。
 
5. 剩余6%的HNF4α陰性的細胞屬于什么類型?
這些細胞亞群很有可能是內(nèi)胚層細胞的混合物，確切的組成尚不清楚。
 
6. Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）可以用于其他種屬多能干細胞分化嗎?
Takara內(nèi)部未做過其他種屬多能干細胞的分化驗證。
 
7. 分化至32天后人iPS-肝細胞會怎么樣？會失去細胞活力，不再保持肝細胞特性還是死亡?
Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）支持人iPS-肝細胞維持培養(yǎng)至32天，額外使用Cellartis Hepatocyte Maintenance Medium(Y30051)可以繼續(xù)維持培養(yǎng)10天，即至４２天，隨后肝細胞將喪失活力，不再貼壁，出現(xiàn)凋亡。
 
8. Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）獲得的人iPS-肝細胞與人原代肝細胞相比如何?
主要的區(qū)別是人原代肝臟細胞功能特性在培養(yǎng)中會迅速下降損失，然而Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）獲得的人iPS-肝細胞可以維持功能特性數(shù)周，并且這些分化獲得的人iPS-肝細胞具備白蛋白分泌、LDL攝取等很多關(guān)鍵的肝細胞功能特性，與原代肝細胞功能相似，更多數(shù)據(jù)信息詳見以下技術(shù)資料。
 
Next-generation human iPS cell-derived hepatocytes for metabolic disease modeling
 
此外，由于人類群體中顯著的代謝多樣性，不同批次的原代肝細胞顯示出大的差異性。因此，在使用原代肝細胞的實驗或研究中，當(dāng)迫于供體材料有限等原因轉(zhuǎn)向其他新的批次的時候，研究者不得不考慮供體差異性的問題。而人iPS-肝細胞通過對同一供體來源的人iPS細胞持續(xù)定向分化，可以實現(xiàn)對同一供體背景的肝細胞的穩(wěn)定供應(yīng)。
 
9. 分化至第幾天可以作為肝細胞開始使用?
通常分化至21天的細胞被認為是肝細胞可以開始使用。然而，21天后的肝細胞繼續(xù)成熟，如胎兒標(biāo)志物AFP在21天-39天逐步下調(diào)，因此，最佳的使用日期取決于具體的應(yīng)用和對肝細胞成熟的要求。
 
10. 使用Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）獲得的人iPS-肝細胞有什么功能特點?
Cellartis Enhanced hiPS-HEP v2 cells是同樣使用Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）獲得的肝細胞產(chǎn)品，因此可以參考相關(guān)數(shù)據(jù)，如包括表達預(yù)期的標(biāo)志物和呈現(xiàn)成熟肝細胞的功能特征；顯示功能性的葡萄糖調(diào)節(jié)和正常的胰島素反應(yīng)；顯示功能性的脂質(zhì)代謝；表達藥物代謝機制（CYP酶、II相酶、轉(zhuǎn)運蛋白等）。注意，不同供體來源肝細胞如預(yù)期顯示不同的CYP活性譜，更多數(shù)據(jù)信息詳見以下技術(shù)資料。
 
Next-generation human iPS cell-derived hepatocytes for metabolic disease modeling
Next-generation human iPS cell-derived hepatocytes for long-term drug metabolism studies
 
11. 一個Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）可以獲得多少肝細胞?
大約5 x 106 肝細胞，相當(dāng)于50 cm2 匯合的肝細胞，換言之，96孔板的150個孔或24孔板的全部24個孔。
 
12. 使用Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）獲得的人iPS-肝細胞是否表達成人肝細胞標(biāo)志物?
是的，分化獲得的人iPS-肝細胞表達白蛋白、PXR、CYP1A3、CYP2C9和CYP3A4等成人肝細胞標(biāo)志物。
 
13. CYP酶活性如何測定?
使用液相色譜/質(zhì)譜對形成的特定代謝物測定，如代謝物acetaminophen (對應(yīng)CYP1A), 4-OH-Diclofenac (對應(yīng)CYP2C9), OH-Bufuralol (對應(yīng)CYP2D6) 和1-OH-Midazolam (對應(yīng)CYP3A)，Protocol詳見以下技術(shù)資料。
 
A simple and complete system to generate mature hepatocytes from various iPS cell sources
 
14. 使用Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）獲得的人iPS-肝細胞是否具有藥物代謝活性?
是的, 分化獲得的人iPS-肝細胞表達基礎(chǔ)水平的CYP酶活性，如CYP1A，CYP3A，CYP2C09和 CYP2C19等。
 
15. 使用Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）獲得的人iPS-肝細胞是否顯示膽小管的形成?
Takara內(nèi)部未觀察到，但是有客戶反饋觀察到了膽小管的形成。
 
16. 使用Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）獲得的人iPS-肝細胞中CYP酶活性能否被誘導(dǎo)?
分化獲得的人iPS-肝細胞顯示幾種重要的CYP酶活性表達為基礎(chǔ)水平，然而，只觀察到較低水平的CYP誘導(dǎo)。
 
17. 分化獲得的人iPS-DE細胞可以擴增培養(yǎng)嗎?
DE細胞應(yīng)該具備增殖能力，以下文獻Hannan et al. 2013中提供了多能干細胞向前腸DE細胞分化的Protocol和后續(xù)DE細胞增殖培養(yǎng)的Protocol。Takara并未使用文獻中的Protocol培養(yǎng)測試我們的DE細胞，也沒有維持或擴增DE細胞的培養(yǎng)基。
 
Hannan, N. R. F. et al. Generation of Multipotent Foregut Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells. Stem Cell Reports 1, 293-306 (2013).
 
18. 分化獲得的人iPS-DE細胞可以分離并重新接種嗎?
是的，DE細胞在肝分化前需要分離并重新接種鋪板。
 
19. 分化獲得的人iPS-DE細胞可以分離并凍存嗎?
是的，我們提供DE細胞的凍存Protocol。
 
20. 分化獲得的人iPS-肝細胞可以擴增培養(yǎng)嗎?
不能，肝細胞是終端分化細胞，無法增殖。
 
21. Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）適合使用什么規(guī)格的培養(yǎng)容器?
人iPS-DE分化，培養(yǎng)瓶是最合適的，最小可以使用6孔板。DE-肝分化，推薦24孔板和96孔板，更大的容器如培養(yǎng)瓶也可以使用。
 
22. Takara人iPS-肝分化系統(tǒng)（Y30055）可以進行3D分化嗎?
不能，只適用于2D分化。
 
 
 
 
 

頁面更新：2022-09-01 13:42:27