| Takara IVTpro™ mRNA合成系統(tǒng)重磅上市！ | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| 一款合成高質(zhì)量mRNA的體外轉(zhuǎn)錄（IVT）試劑盒 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| mRNA是由DNA的一條單鏈作為模板轉(zhuǎn)錄而來(lái)的，它在遺傳學(xué)中心法則中，起到指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成的作用。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
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| mRNA由于其自身優(yōu)勢(shì)，可以廣泛應(yīng)用于傳染病預(yù)防疫苗、腫瘤免疫治療等等領(lǐng)域，近年來(lái)成為生物領(lǐng)域各公司關(guān)注的重點(diǎn)，尤其是mRNA疫苗研究日趨火熱。mRNA疫苗是繼滅活疫苗、減毒活疫苗、亞單位疫苗和病毒載體疫苗后的第三代疫苗，具有針對(duì)病原體變異反應(yīng)速度快、生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、易規(guī)?；瘮U(kuò)大等特點(diǎn)。其原理是將含有編碼抗原蛋白的mRNA導(dǎo)入人體，直接進(jìn)行翻譯形成相應(yīng)的抗原蛋白，從而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，達(dá)到預(yù)防免疫的作用。 Takara新推出了一款專(zhuān)業(yè)合成mRNA的IVT反應(yīng)試劑盒，助力mRNA研發(fā)，幫您從無(wú)到有，快速組建mRNA合成技術(shù)路線！ |
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| Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System（Code No. 6141）是能夠簡(jiǎn)便、高效合成帶有Cap結(jié)構(gòu)和Poly(A)序列的mRNA的體外轉(zhuǎn)錄試劑盒。它包含以下兩種制品（可單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)）： | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| ① Cloning Kit for mRNA Template（Code No. 6143）：用于DNA模板構(gòu)建 本試劑盒用于將模板DNA無(wú)縫克隆到預(yù)線性化載體（包含在本試劑盒中）中構(gòu)建用于體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的模板質(zhì)粒。預(yù)線性化載體中包含T7 啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄起始序列 (AGG)、5'-UTR（非編碼區(qū)）、3'-UTR、和105-base Poly(A) 序列。試劑盒還包含用于將目標(biāo)DNA無(wú)縫克隆到預(yù)線性化載體的In-Fusion Snap Assembly Master Mix和FLuc對(duì)照片段（包括15 bp，3' In-Fusion sequence；FLuc CDS；和15 bp，5' In-Fusion sequence）。 ② Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit（Code No. 6144）：RNA合成試劑 本試劑盒以含有T7啟動(dòng)子序列的雙鏈DNA為模板，使用優(yōu)化的高效T7 RNA聚合酶，通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄可合成大量mRNA。除此以外，還包含用于IVT反應(yīng)后消化模板DNA的DNase I和用于純化mRNA的氯化鋰 (LiCl) 溶液。真核細(xì)胞翻譯蛋白質(zhì)需要RNA的5'端有Cap結(jié)構(gòu)，配合使用CleanCap Reagent AG（TriLink公司的Cap類(lèi)似物）可以高效制備具有Cap結(jié)構(gòu)的mRNA。 |
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| ※Cap類(lèi)似物不包含在本制品中，請(qǐng)另外準(zhǔn)備CleanCap Reagent AG (TriLink公司)。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| Takara IVTpro™ mRNA合成系統(tǒng)技術(shù)路線圖： | ||||||||||||||||||||||||||||||||
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| IVT反應(yīng)模板制備： ① 使用In-Fusion方法，將目的基因克隆到預(yù)線性化的模板DNA載體上； IVT反應(yīng)： ② Hind III（Code No. 1060A/B）線性化處理模板DNA載體； ③ 加入Cap類(lèi)似物、NTPs，合成mRNA； DNase I降解模板DNA： ④ DNase I處理產(chǎn)物，去除模板DNA； mRNA產(chǎn)物純化： ⑤ 氯化鋰沉淀法純化mRNA產(chǎn)物； 后續(xù)應(yīng)用： ⑥ 體外翻譯 or 轉(zhuǎn)染細(xì)胞 or 注射動(dòng)物 |
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| Takara IVTpro™ mRNA合成系統(tǒng)五大優(yōu)勢(shì)： | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| 優(yōu)勢(shì)No.1：采用In-Fusion無(wú)縫克隆，輕松構(gòu)建模板質(zhì)粒DNA。 構(gòu)建參加IVT反應(yīng)的DNA模板質(zhì)粒操作非常簡(jiǎn)單，只需設(shè)計(jì)好帶有In-Fusion序列的目標(biāo)基因（GOI），即可一步輕松完成模板質(zhì)粒的構(gòu)建！ |
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| 優(yōu)勢(shì)No.2：通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄（IVT）反應(yīng)合成帶有Cap結(jié)構(gòu)和Poly(A)序列的mRNA。 為什么要合成帶有Cap結(jié)構(gòu)的mRNA？ mRNA的5’端帽子結(jié)構(gòu)（m7GpppN）發(fā)現(xiàn)于上世紀(jì)70年代，它的存在賦予了mRNA穩(wěn)定性并使其能夠有效翻譯。在真核細(xì)胞中，除了識(shí)別蛋白質(zhì)合成的起始之外，5’端帽子結(jié)構(gòu)還充當(dāng)從5’到3’外切核酸酶切割的保護(hù)基團(tuán)。也就是說(shuō)5’Cap相當(dāng)于一頂鋼盔，保護(hù)mRNA不受免疫系統(tǒng)降解，因此Cap結(jié)構(gòu)對(duì)于mRNA疫苗研發(fā)很重要。本試劑盒配合使用CleanCap Reagent AG（TriLink公司的Cap類(lèi)似物）可以高效制備具有Cap結(jié)構(gòu)的mRNA。 |
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| 通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄（IVT）反應(yīng)合成的 mRNA產(chǎn)量： | ||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 此圖分別為加入和不加入CleanCap Reagent AG (3'OMe)的情況下，IVT反應(yīng)溶液中合成Firefly luciferase (螢火蟲(chóng)熒光素酶, FLuc) mRNA的產(chǎn)量。由此可見(jiàn)，Takara IVTpro™ mRNA合成系統(tǒng)兼容CleanCap試劑，使用CleanCap不影響mRNA產(chǎn)量。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| 優(yōu)勢(shì)No.3：優(yōu)化的T7 RNA聚合酶用于IVT反應(yīng)，RNA合成效率高、產(chǎn)量大。 使用本產(chǎn)品，每次反應(yīng)（20 μl 反應(yīng)體系）可以合成高達(dá) 200 μg或更多的RNA。還可以根據(jù)需要放大反應(yīng)體系，即使使用10倍（200 μl）反應(yīng)體系也不影響mRNA預(yù)期產(chǎn)量! |
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| IVT反應(yīng)規(guī)模與mRNA產(chǎn)量的關(guān)系： | ||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 此圖為以Positive Control Template（FLuc）為模板，加入 CleanCap Reagent AG (3'OMe)進(jìn)行IVT放大實(shí)驗(yàn)（除反應(yīng)液量外均按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)所述進(jìn)行）。 由此可見(jiàn)，mRNA產(chǎn)量與反應(yīng)體積成正比，并且按比例放大反應(yīng)溶液體積不會(huì)影響mRNA產(chǎn)量。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| 優(yōu)勢(shì)No.4：獨(dú)立包裝的NTPs，方便修飾NTPs替換，且不影響mRNA產(chǎn)量。 試劑盒包含獨(dú)立包裝的NTPs，方便優(yōu)化或使用修飾NTPs（如假尿苷）進(jìn)行替換，而且不會(huì)明顯降低mRNA的產(chǎn)量。 為什么要使用修飾的NTPs？ 人體免疫系統(tǒng)會(huì)識(shí)別進(jìn)入人體的各種物質(zhì)并將其清除，RNA也不能例外。而人體中本身就有的RNA，卻不會(huì)被人體免疫系統(tǒng)識(shí)別清除，如tRNA。經(jīng)科學(xué)家們研究發(fā)現(xiàn)這些tRNA上的尿苷和體外合成實(shí)驗(yàn)獲得的RNA上的尿苷結(jié)構(gòu)稍有不同，稱(chēng)之為假尿苷。而使用這種修飾的UTP，可以解決mRNA易被免疫系統(tǒng)識(shí)別而被清除的問(wèn)題。 |
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| 優(yōu)勢(shì)No.5：使用氯化鋰（LiCl）溶液進(jìn)行RNA純化，可立即進(jìn)行下游應(yīng)用。 本試劑盒除了提供用于IVT反應(yīng)后消化模板DNA的DNase I，還提供了用于純化mRNA的氯化鋰 (LiCl) 溶液，純化效果更加理想！ 氯化鋰沉淀法純化RNA與離心柱法進(jìn)行比較（Fluc mRNA） |
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| 在含有CleanCap Reagent AG（3'OMe）和N1-甲基假尿苷的IVT反應(yīng)溶液中合成FLuc mRNA，并分別通過(guò)LiCl沉淀法和離心柱法進(jìn)行純化（NucleoSpin RNA Clean-up）。 結(jié)果顯示，用離心柱法僅一次洗脫(Elution x1)得到的RNA要比LiCl沉淀法要少，但兩次洗脫(Elution x2)的RNA量與LiCl沉淀法大致相同。所以使用離心柱法時(shí)我們建議進(jìn)行兩次洗脫，而氯化鋰沉淀法僅需一次即可。 Takara IVTpro™ mRNA合成系統(tǒng)包含您進(jìn)行mRNA合成實(shí)驗(yàn)時(shí)所用到的最基本工具，是您進(jìn)行相關(guān)研究的理想選擇。不管您正在從事于mRNA預(yù)防疫苗、治療疫苗領(lǐng)域還是mRNA治療藥物，您都可以用它來(lái)完成您的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目！ |
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| 相關(guān)產(chǎn)品列表： | ||||||||||||||||||||||||||||||||
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頁(yè)面更新：2023-02-06 11:23:06
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