| 舊友新識(shí)—您真的了解Takara酵母轉(zhuǎn)化試劑盒嗎？ |
| 提到酵母轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，大家應(yīng)該都有所了解，雖然它只是酵母相關(guān)實(shí)驗(yàn)中的小小一環(huán)，卻對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)的成敗與否起著至關(guān)重要的作用，不容忽視。 Takara有一款酵母轉(zhuǎn)化試劑盒（Yeastmaker Yeast Transformation System 2），相信大家都不陌生，常被用來(lái)進(jìn)行酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)，但您真的了解這款試劑盒嗎？它的用途可不僅僅于此呢，只要您的實(shí)驗(yàn)涉及到酵母表達(dá)，它都可以幫您解決酵母轉(zhuǎn)化相關(guān)的難題，現(xiàn)在，讓我們一起來(lái)重新認(rèn)識(shí)它吧。 |
| 制品信息： |
酵母轉(zhuǎn)化試劑盒：Yeastmaker Yeast Transformation System 2（630439） |
本試劑盒采用聚乙二醇（PEG）/醋酸鋰方法高效制備并轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)菌株，適用于小規(guī)?；蛭膸?kù)級(jí)別的高效酵母轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化效率為3 × 105轉(zhuǎn)化子/μg質(zhì)粒DNA。 |
制品特點(diǎn)：
1. 小規(guī)?；蛭膸?kù)規(guī)模的高效轉(zhuǎn)化方法 2. YPD Plus液體培養(yǎng)基提升了轉(zhuǎn)化子的數(shù)量 3. 優(yōu)化的Carrier DNA 兩大優(yōu)點(diǎn)，提高轉(zhuǎn)化效率： 1. 采用“YPD Plus”復(fù)蘇培養(yǎng)基，使更多的克隆子得以存活，為轉(zhuǎn)化過(guò)程提供了更加高效、可靠的方法。 2. 優(yōu)化的Yeastmaker Carrier DNA（鮭魚精子DNA）有助于質(zhì)粒DNA的吸收。 化試劑盒-1.jpg) |
| 更多應(yīng)用案例，助力每一次酵母轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)： |
| 1. 酵母雙雜交系統(tǒng)，構(gòu)建bait/prey蛋白質(zhì)，用于研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)的相互作用。 |
Qu, Y., Wang, X., et al. (2021). ORF3a-Mediated Incomplete Autophagy Facilitates Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus-2 Replication. Frontiers in cell and developmental biology, 9, 716208. |
通過(guò)篩選SARS-CoV-2（嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒-2，2019年冠狀病毒?。ㄐ鹿诜窝祝┐罅餍械牟≡w）的26種病毒蛋白，證明僅ORF3a的表達(dá)足以誘導(dǎo)不完全自噬。 |
| 2. 重組酵母菌株，用于研究重組酵母菌株相關(guān)性能 |
Suzuki, T., Hoshino, T. et al.. (2019). High-temperature ethanol production by a series of recombinant xylose-fermenting Kluyveromyces marxianus strains. Enzyme and microbial technology, 129, 109359. |
通過(guò)構(gòu)建了兩個(gè)重組馬克思克魯維菌株DMB5和DMB13，用于研究表達(dá)木糖還原酶（XR）、NAD+或蛋白質(zhì)工程N(yùn)ADP+依賴性木糖醇脫氫酶（XDH）和木糖醇激酶（XK）。使用Yeastmaker Yeast Transformation System 2對(duì)質(zhì)粒pGK406-XDHXKXR和pGK606-mXDHXXXR進(jìn)行酵母轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化為馬克思克魯維酵母酵母DMB2-108，并稍加修改。用EcoRV消化基于pGK406的質(zhì)粒（pGK406 XDHXXKXR和pGK406 mXDHXXR），然后用于轉(zhuǎn)化到DMB2-108中，分別構(gòu)建重組菌株DMB5和DMB13。質(zhì)粒pGK406用EcoR V消化，然后轉(zhuǎn)化到DMB2-108中以構(gòu)建DMB4（對(duì)照菌株）。將這些菌株與先前報(bào)道的表達(dá)木糖發(fā)酵酵母（Scheffersomyces stipitis）XR和NAD+依賴性XDH以及釀酒酵母XK的菌株DMB3-7進(jìn)行比較，以評(píng)估30°C和40°C下的酶活性和乙醇生產(chǎn)率。 |
| 3. 構(gòu)建酵母載體，進(jìn)行酵母表達(dá)研究 |
| Thimmappa, R., Wang, S.,et al.. (2022). Biosynthesis of saponin defensive compounds in sea cucumbers. Nature chemical biology, 18(7), 774–781. 釀酒酵母是功能分析基因的模式生物，酵母系統(tǒng)已被廣泛用于確認(rèn)幾種植物中脂肪酸去飽和酶的預(yù)測(cè)活性。將空pYES2載體轉(zhuǎn)化的酵母細(xì)胞用作對(duì)照；酵母表達(dá)載體pYES2被用于獨(dú)立克隆BnaFAD2-A5和BnaFAE1-A8基因，將兩個(gè)構(gòu)建體分別轉(zhuǎn)化（使用Yeastmaker Yeast Transformation System 2）到釀酒酵母（INVSc1）中，并在酵母中表達(dá)它們以評(píng)估其功能。 Zafar, S., Tang, M. et al.. (2020). Candidate genes-association study to identify loci related to oleic acid in Brassica napus using SNP markers and their heterologous expression in yeast. Plant physiology and biochemistry : PPB, 146, 294–302. 通過(guò)整合DNA技術(shù)，將紫球海膽（S.purpuratus）LSS、仿刺參(A.japonicus)的OSC1a、OSC2a、OSC1b和OSC2b編碼序列合成為gBlocks。然后在酵母中通過(guò)同源重組方式重組gBlocks以獲得全長(zhǎng)基因。在酵母菌株Gil77（gal2 hem3-6 erg7 ura3-167）中進(jìn)行所有酵母同源重組和表達(dá)分析。使用引物通過(guò)PCR擴(kuò)增gBlocks。然后將擴(kuò)增的gBlocks與用Xba I和Hind III線性化的pYES2載體一起共轉(zhuǎn)化為Gil77。使用Yeastmaker Yeast Transformation System 2進(jìn)行酵母轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化使pYES2載體和gBlock OSC片段之間的體內(nèi)重組，從而產(chǎn)生全長(zhǎng)表達(dá)構(gòu)建體。從酵母中回收質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌（DH5α）中，通過(guò)測(cè)序驗(yàn)證其序列并進(jìn)行后續(xù)酵母表達(dá)相關(guān)研究。 |
| 說(shuō)了這么多，想必您對(duì)于Yeastmaker Yeast Transformation System 2這個(gè)“老朋友”已經(jīng)有了一個(gè)新的認(rèn)識(shí)，不論您是正在進(jìn)行酵母雜交實(shí)驗(yàn)，還是其他酵母表達(dá)實(shí)驗(yàn)，都可以放心選擇這位“老朋友”幫您解決難題喲！ |
頁(yè)面更新：2023-01-10 09:25:59
|
使用規(guī)章丨聯(lián)系方式丨 關(guān)于個(gè)人信息的保護(hù)丨特別說(shuō)明
寶日醫(yī)生物技術(shù)（北京）有限公司
Copyright ? 2015 Takara Biomedical Technology (Beijing) Co., Ltd. All rights reserved. 京ICP備06030419號(hào)-1
京公網(wǎng)安備 110114000405號(hào)
