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| Takara腺相關病毒基因導入系統(tǒng)解決方案 |
| 基因治療將使醫(yī)學領域發(fā)生革命，為治療常見和罕見遺傳性疾病帶來了新希望。在基因治療這場競技賽中，腺相關病毒（AAV）載體已經迅速成為體內基因導入主要平臺之一。 AAV已經在多個遺傳性眼科疾病治療臨床試驗中顯現(xiàn)出有明顯的治療效果，而且不會引起顯著的不良免疫反應。AAV也是一種廣泛應用于癌癥基因治療的病毒載體。多種AAV載體已被用于腫瘤治療，眾多臨床前研究結果顯示，AAV基因治療成功抑制腫瘤生長，致使腫瘤消退。另外，AAV還廣泛應用于血液病、代謝類等疾病的治療研究，展現(xiàn)出了廣闊的應用前景。 由于AAV免疫原性和細胞毒性低，能夠轉導非分裂細胞，并且整合到宿主基因組中的頻率非常低，因此被眾多研究學者認為安全性更高。經過重組和改造的AAV擁有不同的血清型，根據(jù)血清型不同而具有不同的宿主范圍和病毒特征，可以有效作用于特定細胞類型，包括分裂和非分裂細胞類型。使用者需要根據(jù)靶標細胞或者組織類型選擇適合的血清型。目前使用頻率較高的血清型為AAV2，其它血清型也逐漸被廣泛使用。 |
| AAV基因組是約4.7 kb的單鏈線狀DNA分子，在兩端都有被稱為反向末端重復序列（ITR）的發(fā)夾結構。ITR的功能在于基因組復制起始位點及輔助病毒粒子包裝。AAV基因組包含了3個開放閱讀框：Rep編碼參與復制和轉錄的蛋白質；Cap編碼病毒衣殼蛋白質；AAP編碼用于病毒粒子形成的非結構蛋白質。Rep區(qū)域編碼4種不同的蛋白質（Rep78, Rep68, Rep52和Rep40，Cap區(qū)域編碼3種不同的蛋白質（VP1, VP2 和 VP3 ）。 一般來說，AAV只有在輔助病毒（如腺病毒或皰疹病毒）存在下才能復制。目前，AAV的包裝制備大多使用無輔助病毒包裝系統(tǒng)，也就是在不使用輔助病毒的情況下制備重組AAV。AAV的制備也是通過將編碼重組AAV所需因子的質粒轉染HEK 293細胞來完成的。制備AAV載體一般需要以下3種質粒：含有目的基因表達框和2個ITR的質粒，包含AAV2 Rep基因和各種血清型Cap基因的質粒，包含腺病毒E2A、E4、VA基因的質粒。 |
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| 從表達、包裝、提取到純化和滴度測定，一站式購齊，省心無憂。 |
| ★ 無輔助病毒AAV載體制備系統(tǒng) |
| AAV Helper Free System是一種特別的可制備高滴度AAV的無輔助病毒系統(tǒng)，可提供AAV 1型 (AAV1) 、2型 (AAV2) 、5型 (AAV5) 、6型 (AAV6) 制備系統(tǒng)。我們在該系統(tǒng)的包裝載體中引入了一種可提高病毒滴度的人源miRNA（hsa-miR-342），與一般只表達Rep基因和Cap基因的pRC2 Vector相比，病毒滴度可提高2倍。由于AAV是一種微小病毒，可克隆的目的基因片段大小限制在不超過2.5 kb。 |
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| ★ 強強聯(lián)合的AAV-CRISPR系統(tǒng) |
| AAV與CRISPR/Cas9基因編輯技術結合使用，可以通過AAV載體導入CRISPR/Cas9進行基因治療，可以讓更多無望治療的疾病變成有望治愈。在AAV-CRISPR 系統(tǒng)方面，可以提供釀膿鏈球菌（Streptococcus pyogenes）和金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）兩種不同來源Cas9的系統(tǒng)：攜帶釀膿鏈球菌來源的Cas9（SpCas9）的雙載體系統(tǒng)和攜帶金黃色葡萄球菌來源的Cas9（SaCas9）的單載體系統(tǒng)。SaCas9與SpCas9不同，SaCas9所識別的PAM序列為NNGRR(T)，N表示任意堿基，R表示A或者G，T具有較強的偏好性。 |
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| ★ 擴大AAV載體產量必備單品 |
| AAV2傾向于保留在制備細胞中（由于肝素結合域的原因），可以使用專用的提取試劑AAVpro Extraction Solution從制備細胞中提取并回收病毒粒子。而其他血清型AAV，更容易釋放到培養(yǎng)液中，因此從培養(yǎng)液中分離AAV可以有效擴大AAV載體產量。AAVpro Concentrator就是可以從細胞培養(yǎng)上清液中分離濃縮任何血清型AAV載體這樣一種簡便高效的方法。與僅涉及AAV粒子沉淀的其他濃縮方法相比，AAVpro Concentrator操作過程中包含了過濾步驟，可以產生更高純度的AAV載體。 |
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| ★ 通用簡便的AAV載體純化方式 |
| AAV載體作為體內基因導入的主要平臺之一，使用高純度的病毒粒子是很有必要的。即便是將基因導入至培養(yǎng)細胞時，使用純化后的AAV粒子也可以消除雜質所帶來的影響。AAV粒子的純化通常使用CsCl密度梯度超速離心法或碘克沙醇超速離心法，但這兩種方法不僅需要熟練的操作手法，同時還存在耗時長和回收率低等問題。Takara通用型AAVpro Purification Kit不受血清型限制，可以從AAV粒子制備細胞中純化出AAV粒子：特別的AAV粒子提取方法，省去了凍融和超聲破碎等繁瑣操作；特別的AAV載體純化方法，通過簡單的操作即可有效去除雜質。 |
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| ★ 通用快速的AAV滴度測定方法 |
| Takara基于qPCR技術開發(fā)了通過測定AAV基因組來測定AAV滴度的試劑盒，同以往的DNA印跡法和ELISA法相比，可以更準確、更快速地(2.5小時以內)獲得實驗結果。AAVpro Titration Kit(for Real Time PCR)Ver.2試劑盒中的引物特異針對AAV載體的公共區(qū)域AAV2反向末端重復序列（ITR）而設計，如果載體的ITR區(qū)域來自AAV2（實際上常用的AAV載體也正是這樣的情況），那么無論您制備出的AAV病毒是哪種血清型（取決于病毒包裝時所使用的Cap基因），都可以使用這個試劑盒測定病毒滴度。如果不確定該試劑盒是否適用，請與我們的技術服務部門聯(lián)系，并提供您的載體序列。 |
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| Takara Bio作為重要的生物技術企業(yè)，在病毒基因導入系統(tǒng)方面造詣頗深、體系完備，擁有慢病毒系統(tǒng)、逆轉錄病毒系統(tǒng)、腺相關病毒系統(tǒng)、腺病毒全套解決方案，為相關生物學基礎研究提供強力支持，為寄予厚望的細胞與基因治療研究護航加碼。 |
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頁面更新：2023-05-30 14:43:57
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