| 做二百重的PCR，酶您選好了嗎？ | |||||||||||||||||||||||||||||||||
| 多重PCR也稱復(fù)合PCR，它是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上改進(jìn)并發(fā)展起來的一種新型PCR擴(kuò)增技術(shù)。它的基本原理與常規(guī)PCR相同，區(qū)別在于多重PCR是在反應(yīng)體系中加入了兩對以上引物，各對引物分別結(jié)合在模板相對應(yīng)部位，最終擴(kuò)增出兩條以上目的DNA片段。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| 多重PCR可以在同一反應(yīng)管內(nèi)同時(shí)檢測、鑒別出多種病原體或者基因型，具有系統(tǒng)化、高效、簡便、經(jīng)濟(jì)、節(jié)省試劑和珍貴樣本的特點(diǎn)，能夠提高樣本的利用率，因此也被廣泛應(yīng)用于多種基因檢測領(lǐng)域，例如： | |||||||||||||||||||||||||||||||||
| ● 臨床病原微生物檢測 ● 病毒檢測 ● 食品安全檢測 ● 植物分子育種與病蟲害檢測 ● 產(chǎn)前診斷 ● 腫瘤用藥指導(dǎo)等研究 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| 特別是隨著NGS技術(shù)的發(fā)展，使得對PCR產(chǎn)物進(jìn)行高靈敏度、高分辨率的檢測成為了可能，例如病原靶向測序（tNGS）方法，就是將多重PCR與NGS技術(shù)相結(jié)合，可以對待測樣本中幾十種甚至成百上千種已知病原微生物或耐藥基因進(jìn)行檢測，在臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域受到了廣泛的關(guān)注。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
| 多重PCR需要在同一反應(yīng)體系內(nèi)對多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行特異性擴(kuò)增，但并不是引物和模板簡單的混合及疊加，其難點(diǎn)在于如何兼容多個(gè)靶標(biāo)之間的擴(kuò)增條件，以及考慮多組引物對之間的結(jié)合與競爭性擴(kuò)增，最終實(shí)現(xiàn)多個(gè)靶標(biāo)的均衡、特異性擴(kuò)增。所以在進(jìn)行多重PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，要根據(jù)實(shí)際情況對實(shí)驗(yàn)條件不斷優(yōu)化，通常我們會(huì)從反應(yīng)體系和反應(yīng)條件兩個(gè)方面進(jìn)行優(yōu)化，反應(yīng)體系包括引物的設(shè)計(jì)及反應(yīng)濃度 、反應(yīng)緩沖液的體積及其鹽離子濃度、模板質(zhì)量及濃度、PCR酶及濃度、dNTP及Mg2+濃度等；反應(yīng)條件包括退火時(shí)間及溫度、延伸時(shí)間及溫度、反應(yīng)循環(huán)數(shù)。 在這些影響因素中，PCR酶及buffer的影響更多的依賴于商品化產(chǎn)品的性能以及實(shí)驗(yàn)者的選擇，鑒于多重PCR的反應(yīng)原理和特點(diǎn)，PCR酶需要具備擴(kuò)增能力強(qiáng)、高收量、高靈敏度等特點(diǎn)，因此，選擇對了PCR酶，就會(huì)讓多重PCR實(shí)驗(yàn)達(dá)到事半功倍的效果！ Takara公司在多重PCR應(yīng)用方面擁有多款產(chǎn)品，可助力您突破重重難關(guān)！ |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| Titanium Taq DNA聚合酶是一種通過基因工程手段特殊改造的Taq酶，缺失了野生型Taq酶的5'-3'外切酶活性，使其具備更強(qiáng)大的擴(kuò)增性能，可用于擴(kuò)增高度復(fù)雜的DNA混合物。同時(shí)還精心設(shè)計(jì)了氨基酸替代物，以增加其溶解度，進(jìn)而增加其靈敏度。Titanium Taq添加了Hot Start PCR抗體，可防止非特異性擴(kuò)增和引物二聚體的形成，適合各種樣品，包括細(xì)菌和質(zhì)粒DNA、cDNA和復(fù)雜基因組DNA等。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| Titanium Taq還有個(gè)優(yōu)勢就是在較寬的Mg2+濃度范圍內(nèi)具有良好的擴(kuò)增性能，可縮短優(yōu)化實(shí)驗(yàn)所花費(fèi)的時(shí)間，尤其在進(jìn)行多重PCR時(shí)，不同的靶序列對Mg2+的濃度需求可能會(huì)有所不同，使用Titanium Taq會(huì)使優(yōu)化過程更加簡單。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| Titanium Taq DNA聚合酶已經(jīng)過驗(yàn)證適用于多重PCR反應(yīng)，已在Affymetrix microarray以及Mass ARRAY系統(tǒng)中(Jurinke et al. 2012)實(shí)現(xiàn)了應(yīng)用。使用Titanium Taq DNA聚合酶進(jìn)行多重PCR的實(shí)驗(yàn)例如下圖所示： | |||||||||||||||||||||||||||||||||
 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| SuperPlex Premix是一款包含Takara Bio高收量PCR酶Titanium Taq的hot-start型2倍濃度的預(yù)混液，僅需較少的PCR循環(huán)就能夠得到低背景的檢測結(jié)果，是多重PCR和高產(chǎn)量單重PCR的理想選擇，可更大限度地減少優(yōu)化多重反應(yīng)所需的時(shí)間。本產(chǎn)品包含了多重PCR所需的全部試劑，只需添加引物、模板和水即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，減少由繁瑣操作帶來的實(shí)驗(yàn)誤差。 實(shí)驗(yàn)例：使用SuperPlex Premix進(jìn)行多重PCR，體驗(yàn)擴(kuò)增均一性與速度并存！ 在對人CFTR基因進(jìn)行20重PCR的研究中，為了進(jìn)一步減少測定時(shí)間，使用SuperPlex Premix推薦的較少的PCR循環(huán)數(shù)，對不同品牌多重PCR試劑的性能進(jìn)行了測定，結(jié)果顯示，僅SuperPlex Premix能夠獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其他產(chǎn)品均出現(xiàn)了不同程度的smear甚至沒有擴(kuò)增結(jié)果的情況，這說明使用Superplex Premix不僅可以獲得均一的擴(kuò)增結(jié)果，并且可以幫助我們節(jié)省更多的時(shí)間！ |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| 上表為對人CFTR基因進(jìn)行20重PCR的研究中，各公司推薦的PCR循環(huán)時(shí)間。使用SuperPlex™ Premix做多重PCR的循環(huán)時(shí)間最短。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
| Multiplex PCR Assay Kit Ver.2可在短時(shí)間內(nèi)特異性地進(jìn)行無偏差的PCR擴(kuò)增，非常適合多重PCR反應(yīng)，通過調(diào)整酶量和反應(yīng)條件，可進(jìn)行約200對引物的多重PCR。此外也可以用于普通的單重PCR反應(yīng)，尤其是在目的片段難擴(kuò)增、非特異性條帶及Smear大量出現(xiàn)時(shí)使用，可在短時(shí)間內(nèi)特異性擴(kuò)增目的片段。 Multiplex PCR Assay Kit Ver.2是一款誕生于2015年的產(chǎn)品，上市初衷是面向從事基因分型、表達(dá)等基礎(chǔ)研究以及NGS研究的客戶，一直不溫不火，近年來，隨著遺傳病檢測、傳染病防控力度的加大，以及腫瘤患者數(shù)量的不斷增長，市場對多重PCR的檢測需求持續(xù)提升，使得Multiplex PCR Assay Kit Ver.2這款產(chǎn)品也越來越受到相關(guān)研究人員和機(jī)構(gòu)的關(guān)注，好評如潮。作為一款險(xiǎn)些湮沒在時(shí)光洪流中的經(jīng)典產(chǎn)品，Multiplex PCR Assay Kit Ver.2用實(shí)力完美的詮釋了是金子總會(huì)發(fā)光的深刻哲理。 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| 普通單重PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)例 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| 10重PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)例 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| 反應(yīng)時(shí)間對比 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| 207重PCR用于NGS分析的應(yīng)用例 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
| 使用Ion AmpliSeq Cancer Hotspot Panel v2（Life Technologies）和本產(chǎn)品、以人基因組DNA為模板對207個(gè)目的基因進(jìn)行Multiplex PCR，制備文庫后進(jìn)行NGS測序。 此外，從中任意選取16個(gè)目的基因使用qPCR對Multiplex PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行定量，通過與擴(kuò)增前人基因組DNA的定量值（PC）和C公司產(chǎn)品擴(kuò)增產(chǎn)物的定量值進(jìn)行比較，確認(rèn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)生的偏好性程度。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
確認(rèn)多重PCR擴(kuò)增的基因 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
以上介紹的三個(gè)系列產(chǎn)品可謂各有特點(diǎn)和側(cè)重，Titanium Taq作為一款高性能PCR酶推出較早（1998年），隨著科研領(lǐng)域的不斷進(jìn)步和發(fā)展，研究人員的反復(fù)嘗試和驗(yàn)證，漸漸在多重PCR應(yīng)用方面嶄露頭角，屬于“兼職”，相對而言，實(shí)驗(yàn)時(shí)需要更多的摸索和優(yōu)化；而另兩個(gè)系列可以說是為了多重PCR而生，屬于“全職”，SuperPlex Premix作為新生力量主打性能和速度并存，預(yù)混型更方便操作，Multiplex PCR Assay Kit Ver.2雖然是非預(yù)混型的“老將”，但貴在有200重PCR的“工作經(jīng)驗(yàn)”傍身，對于從事數(shù)十重、數(shù)百重PCR研究的人員來說，更容易取得成功。 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
產(chǎn)品列表： |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| *1：產(chǎn)品更多規(guī)格，請登錄官網(wǎng)grayarearadio.com查看。 *2：Titanium® Taq SP系列中包含的Titanium Taq DNA Polymerase 和TaqStart Antibody與常規(guī)Titanium Taq產(chǎn)品相同，不同點(diǎn)在于SP系列含有改良的、免授權(quán)的緩沖液配方，適合商業(yè)和OEM用途，包括用于分子診斷服務(wù)和試劑盒。上表也列出了SP系列預(yù)混型凍干版本、無甘油版本的產(chǎn)品信息。 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
頁面更新：2023-06-01 08:40:20
|
使用規(guī)章丨聯(lián)系方式丨 關(guān)于個(gè)人信息的保護(hù)丨特別說明
寶日醫(yī)生物技術(shù)（北京）有限公司
Copyright ? 2015 Takara Biomedical Technology (Beijing) Co., Ltd. All rights reserved. 京ICP備06030419號-1
京公網(wǎng)安備 110114000405號
