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自從情人節(jié)企劃活動(dòng)開展以來，我們收到了很多有愛的小故事，首先在這里感謝大家的關(guān)注，也把最重要的提醒寫在最前面，記得掃描每期文末二維碼打卡！打卡十二期的約定可要記得呀～ 7月銀色情人節(jié)是把意中人帶回家給父母認(rèn)識(shí)，邀請(qǐng)長(zhǎng)輩一起見證甜蜜愛情的節(jié)日！你們一起回家見家長(zhǎng)了嗎？希望大家都能有走出第一步的勇氣，和愛的人一起牽手回家！ 而Takara今天想把不一樣的浪漫介紹給你～ 酵母雙雜交技術(shù)是由Fields和Song在1989年提出的。該技術(shù)的產(chǎn)生是基于對(duì)酵母細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子GAL4性質(zhì)的研究。轉(zhuǎn)錄因子GAL4包括兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，分別是位于N端的DNA結(jié)合域（DNA binding domain，DNA-BD）和位于C端的轉(zhuǎn)錄激活域（Activati on domain，AD)。DNA-BD能夠識(shí)別并結(jié)合于GAL4效應(yīng)基因（GAL4-responsivegene）的上游激活序列(Upstream activating sequence，UAS)。而AD則是通過與轉(zhuǎn)錄機(jī)制（transcription machinery）中的其他成分之間的結(jié)合作用，以啟動(dòng)UAS下游的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。當(dāng)DNA-BD和AD分開獨(dú)立存在時(shí)，并不能激活轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，只有當(dāng)二者在空間距離非常接近時(shí)，才會(huì)呈現(xiàn)完整的GAL4轉(zhuǎn)錄因子活性并可激活UAS下游啟動(dòng)子，使啟動(dòng)子下游基因得到轉(zhuǎn)錄。根據(jù)這個(gè)特性，將編碼DNA-BD的基因與已知蛋白質(zhì)的基因構(gòu)建在同一個(gè)表達(dá)載體上，所獲得的融合蛋白質(zhì)叫做誘餌蛋白質(zhì)（Bait）；將編碼AD的基因和cDNA文庫的基因構(gòu)建在另一個(gè)表達(dá)載體上，所得到的融合蛋白質(zhì)叫做獵物蛋白質(zhì)（Prey）。Bait和Prey發(fā)生相互作用，形成完整的轉(zhuǎn)錄因子GAL4，使酵母菌基因組的效應(yīng)基因表達(dá)。 當(dāng)我們的酵母雜交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到后期，菌落PCR是分析驗(yàn)證插入片段，并對(duì)陽性克隆進(jìn)行分類的簡(jiǎn)便、快速的方法。 |
| 兩個(gè)酵母雜交實(shí)驗(yàn)寶藏單品！了解一下Takara快速驗(yàn)證插入片段的小妙招！ |
| 可以驗(yàn)證整合到酵母單雜交實(shí)驗(yàn)中酵母基因組的Bait DNA序列。 在Matchmaker Gold酵母單雜交系統(tǒng)中，目標(biāo)/bait DNA序列重復(fù)串聯(lián)后克隆到pAbAi報(bào)告載體上。用同源重組的方法將攜帶Bait的載體整合到Y(jié)1HGold酵母基因組中，用于后續(xù)文庫的篩選。在文庫中，可能與Bait DNA序列相互作用的Prey蛋白的cDNA與GAL4 AD融合表達(dá)，文庫通過SMART技術(shù)與同源重組技術(shù)直接構(gòu)建于Y1HGold[Bait-AbAi]報(bào)告菌株中。當(dāng)Prey蛋白與Bait序列結(jié)合時(shí)，相應(yīng)的GAL4 AD會(huì)激活A(yù)bAr的表達(dá)，酵母可在添加了AbA的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。在文庫篩選中，編碼prey蛋白的質(zhì)粒可以較容易地從酵母克隆中分離出來進(jìn)行后續(xù)的驗(yàn)證分析。 |
| 可以快速分析酵母單雜交實(shí)驗(yàn)及酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)中陽性克隆子的插入片段有無及大小。 Matchmaker Insert Check PCR Mix 2是2X預(yù)混液，可以簡(jiǎn)便快速地直接以酵母菌落為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。該混合液可以用于Matchmaker Gold酵母單雜交和酵母雙雜交篩選系統(tǒng)，可以快速地?cái)U(kuò)增、分選并分析文庫篩選所獲得的陽性克隆中Prey/文庫質(zhì)粒的cDNA插入片段。Matchmaker Insert Check PCR Mix 2包含PCR聚合酶、引物、dNTPs和緩沖液，僅僅需要將待驗(yàn)證的細(xì)胞添加到混合液中，然后進(jìn)行PCR即可得到結(jié)果。 |
| “小妙招”+“實(shí)驗(yàn)必需篩選試劑”！本期活動(dòng)貼心推出酵母雜交實(shí)驗(yàn)篩選驗(yàn)證套裝！ 歡迎各位寶粉直接聯(lián)系代理商按需訂購！ |
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| 活動(dòng)時(shí)間：2023/7/14-2023/8/14 |
| 活動(dòng)參與方式：聯(lián)系代理商下單即可訂購。PS：不要忘了掃描下方二維碼參與我們的情人節(jié)企劃活動(dòng)呀～ |
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| 活動(dòng)期間按套裝下單還可獲得下單禮：Takara定制白大褂。 |
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| 關(guān)聯(lián)產(chǎn)品推薦： |
| 將Bait DNA序列重復(fù)串聯(lián)后克隆到報(bào)告載體上，系統(tǒng)文庫通過SMART技術(shù)與同源重組技術(shù)直接構(gòu)建于Y1HGold報(bào)告菌株中用于后續(xù)文庫的篩選。 |
| 系統(tǒng)中所包含的新的Y2HGold酵母菌株、更加嚴(yán)密的篩選報(bào)告基因、簡(jiǎn)單易用的文庫、高水平表達(dá)的載體以及基于SMART技術(shù)的文庫構(gòu)建試劑盒。 |
| 今天有認(rèn)真準(zhǔn)備了一個(gè)浪漫小彩蛋！快數(shù)一數(shù)今天文章里的漢字是不是有1314個(gè)？ 【我真的有在認(rèn)（cou）真（zi）做（shu）這個(gè)非常非常非常非常非常非常浪漫的彩蛋！】 |
頁面更新：2023-07-14 14:21:20
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