| Takara小鼠BCR建庫產(chǎn)品助力開發(fā)新型的HIV疫苗的研究 | ||||||||||
| 艾滋病是一種危害性較大的傳染病。雖然國內(nèi)外專家在抗艾的路上取得了卓越的成績，但是開發(fā)安全有效的艾滋病毒疫苗仍然是一項重大的科學(xué)挑戰(zhàn)。篩選有前景的HIV候選疫苗需要對它們引發(fā)的免疫反應(yīng)有一個全面的了解，而這只能通過免疫組庫測序?qū)細胞和B細胞進行動態(tài)監(jiān)測才能充分揭示。 在一項研究中，2023年諾貝爾獎得主Drew Weissman研究團隊以及其他科研單位的科學(xué)家成功遞送了包裹在脂質(zhì)納米顆粒(LNPs)內(nèi)的編碼HIV包膜(Env)三聚體蛋白的mRNA。在小鼠模型中，HIV mRNA-LNPs表達的抗原Env誘導(dǎo)B細胞克隆的擴增，并刺激多種艾滋病病毒抗體的免疫應(yīng)答，廣譜中和抗體(bnAbs)的分泌也證明了這一點。相關(guān)研究成果發(fā)表在《Cell Reports》期刊上，題為“mRNA-encoded HIV-1 Env trimer ferritin nanoparticles induce monoclonal antibodies that neutralize heterologous HIV-1 isolates in mice”。 其中，Takara Bio的免疫組庫分析試劑盒SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit用于制備小鼠抗體重鏈和輕鏈的可變區(qū)測序文庫(下面流程圖)，研究人員在BCR位點內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一些關(guān)鍵突變，這些突變揭示了擴增的B細胞克隆作為分泌的tier 2 bnAbs的前體，這對于廣譜病毒中和非常重要。 而且，本研究還證明了這些關(guān)鍵突變誘導(dǎo)的單克隆抗體可以中和異源HIV-1分離株。雖然大規(guī)模制造復(fù)雜的納米顆粒蛋白免疫原或許面臨著巨大的現(xiàn)實和資金挑戰(zhàn)。但是倍感鼓舞的是，本研究提供了一種開發(fā)HIV- mRNA-LNP疫苗的有潛力的策略。很高興在這項研究中，Takara Bio的Immune profiling為破譯mRNA-LNP疫苗反應(yīng)的基礎(chǔ)免疫學(xué)做出了重要貢獻。 |
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| 文獻中使用的小鼠BCR建庫試劑盒SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit基于5’RACE和NGS技術(shù)，提供了一種靈敏，準(zhǔn)確，優(yōu)化的BCR庫分析方法。雖然采用多重PCR可以在一個反應(yīng)中對多個BCR基因進行擴增，但也被證明在對特定序列進行擴增時存在靈敏度，特異性和偏差的問題，這些都可能帶來同種型的鑒別困難。而5’RACE方法減少了變異性并且可以從BCR重鏈或輕鏈的恒定區(qū)引發(fā)擴增。試劑盒將這些優(yōu)點與基因特異性擴增相結(jié)合可以捕獲BCR完整V(D)J可變區(qū)，提供了一種高靈敏度、可重復(fù)的B細胞庫分析方法。在大部分情況下，通過H/K/L鏈的下游測序分析可以準(zhǔn)確鑒別克隆型，可靠確定同種型。 Takara Bio一直致力于為我們客戶提供創(chuàng)新的、高品質(zhì)的產(chǎn)品。近期，我們改進了本研究中使用的BCR試劑盒，發(fā)布了新的SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)： 升級點1：自帶BUFF，添加分子條形碼（UMI） 可以消除PCR錯誤或duplication以及測序偏向，從而確保獲得更準(zhǔn)確和可靠的結(jié)果！ 升級點2：操作流程更方便 試劑盒中的重、輕免疫球蛋白鏈引物以及酶均是預(yù)混形式，減少了試劑組分?jǐn)?shù)量和操作步驟！ 升級點3：樣本類型兼容性更友好 支持不同起始量的RNA（RIN>7）起始，均可獲得高品質(zhì)的測序文庫。比如小鼠脾臟、骨髓或者外周血單核細胞（PBMC）純化的10 ng-1 μg的總RNA，也支持從小鼠血液或者淋巴結(jié)中提取的RNA樣本。 升級點4：測序平臺選擇更靈活 該試劑盒所建文庫支持更多樣的測序平臺。既支持Miseq平臺（分析V(D)J全長信息），也支持其它Illumina平臺，只分析CDR3區(qū)。 |
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| 產(chǎn)品實驗例 | ||||||||||
| ● SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)可以對稀有克隆型進行準(zhǔn)確地檢測 Takara科學(xué)家向10 ng 小鼠脾臟 RNA樣本中摻入不同起始量的（100pg、10pg和1pg RNA）的10E8雜交瘤細胞系來源的RNA。使用SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)制備BCR文庫，并在Illumina NextSeq上測序。測序reads downsample至3M reads。 |
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| ● SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)有更高的靈敏度 為了比較SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)與其他同類試劑盒的性能，使用10 ng小鼠脾臟RNA制備BCR文庫。N公司試劑盒測序reads downsample至1M reads。SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)的測序reads downsample至0.5M reads。結(jié)果顯示，相同測序深度下，SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)檢測到的BCR克隆型比N公司試劑盒多4倍，擁有更高的靈敏度。 |
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| ■ 產(chǎn)品信息 | ||||||||||
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頁面更新：2024-04-10 09:47:49
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