低價(jià)格高品質(zhì)的TaKaRa Taq HS真實(shí)數(shù)據(jù)大公開(kāi)! | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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眾多廠家選擇TaKaRa Taq™ HS作為檢測(cè)試劑的原料,是對(duì)其質(zhì)量一致性、批間穩(wěn)定性和良好性?xún)r(jià)比的肯定。看了下面的資料,相信您會(huì)對(duì)TaKaRa Taq HS的制品質(zhì)量和穩(wěn)定性有新的認(rèn)識(shí)。 如果您有興趣試用該產(chǎn)品,請(qǐng)隨時(shí)和我們聯(lián)系。如果您有意長(zhǎng)期、批量購(gòu)買(mǎi)該產(chǎn)品,我們歡迎并恭候您的垂詢(xún)。 |
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———— Takara真實(shí)數(shù)據(jù)大曝光 ———— | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Takara公司的酶活測(cè)定方法:放射化學(xué)測(cè)定法(Radioactive Isotope,RI) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
TaKaRa Taq HS活性定義:用活性化的大馬哈魚(yú)精子DNA作為模板/引物,在74℃,30分鐘內(nèi),攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為 1 個(gè)活性單位(U); TaKaRa Taq HS酶活測(cè)定方法:RI法,通過(guò)測(cè)定H3標(biāo)記dTTP的攝入量計(jì)算活性。該方法準(zhǔn)確性高,特異性強(qiáng)。 |
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· 其他公司酶活測(cè)定方法:熒光修飾法、功能測(cè)定法等,都需要使用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品,屬于相對(duì)活性測(cè)定,準(zhǔn)確度低。 · 表中數(shù)據(jù)顯示,不同公司的Taq HS,標(biāo)簽均為5 U/μl,但實(shí)測(cè)濃度偏高或偏低,每批產(chǎn)品的酶活性變化會(huì)很大。 |
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TaKaRa Taq HS的酶活,采用權(quán)威的放射性活性測(cè)定法,準(zhǔn)確性更高,從源頭上保證了產(chǎn)品活性的真實(shí)性、穩(wěn)定性、一致性 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1)抗體封閉效率差異 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
結(jié)果說(shuō)明 · 每Lot的封閉效率均在97%以上,說(shuō)明抗體對(duì)TaKaRa Taq™ HS的封閉效果很好,可以有效減少非特異性擴(kuò)增。 · 通常分子體外診斷Kit的CV要求是5%以?xún)?nèi)。TaKaRa Taq™ HS封閉效率的CV僅為0.53%,說(shuō)明批間差非常小,穩(wěn)定性高,可靠性高,更大程度降低了IVD Kit的研發(fā)、質(zhì)控難度。 |
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不同批次的TaKaRa Taq™ HS,差異非常小,穩(wěn)定性非常高。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2)End Point PCR產(chǎn)物差異 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
結(jié)果說(shuō)明 · 使用TaKaRa Taq HS擴(kuò)增8 kb產(chǎn)物 ,10 Lot電泳結(jié)果基本相當(dāng);PicoGreen定量PCR產(chǎn)物,Lot間CV值僅為3.05%,說(shuō)明Lot差非常小。 · 電泳結(jié)果及PicoGreen定量結(jié)果均顯示TaKaRa Taq HS 優(yōu)于A公司產(chǎn)品。 |
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3)qPCR結(jié)果差異 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
結(jié)果說(shuō)明:進(jìn)行qPCR時(shí), · 不同濃度梯度下,TaKaRa Taq HS 10 Lot間Ct值的變異系數(shù)CV非常小,0.3%-0.9%之間 ,說(shuō)明Lot差非常小,更大程度保證了IVD產(chǎn)品的CV值要求,為診斷企業(yè)研發(fā)、生產(chǎn)穩(wěn)定的IVD產(chǎn)品提供了保障。 · TaKaRa Taq HS 的Ct值明顯小于A公司產(chǎn)品,性能更優(yōu)。 |
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1)Hot Start PCR的原理 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Hot Start PCR法是提高PCR特異性的重要方法之一。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
master mix的配置階段,PCR第一個(gè)循環(huán)前的升溫階段,容易產(chǎn)生引物二聚體 or 引物模板的錯(cuò)配。使用抗體修飾的PCR酶可以有效降低非特異擴(kuò)增。 · 如果PCR酶沒(méi)有和抗體結(jié)合,PCR酶的聚合酶活性會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)配被擴(kuò)增,也就是非特異性擴(kuò)增,并且這個(gè)錯(cuò)誤的PCR產(chǎn)物在后續(xù)PCR循環(huán)中會(huì)被不斷放大。 · 如果PCR酶和抗體結(jié)合,PCR循環(huán)前,抗體抑制了聚合酶的活性,該階段的錯(cuò)配不會(huì)被擴(kuò)增。后續(xù)PCR循環(huán)時(shí),抗體變性,聚合酶活性恢復(fù),錯(cuò)配被打開(kāi),就不會(huì)產(chǎn)生大量錯(cuò)誤的PCR產(chǎn)物。從而降低了非特異性擴(kuò)增,提高目的DNA片段的擴(kuò)增效率,降低了假陽(yáng)性出現(xiàn)的概率。 |
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2)抗體對(duì)Taq酶的封閉效果 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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結(jié)果說(shuō)明:進(jìn)行qPCR時(shí), · 各品牌酶濃度均表示為5 U/μl,但實(shí)測(cè)濃度相差很大。 · TaKaRa Taq HS,酶的活性定量準(zhǔn)確,抗體封閉效率優(yōu)良。 · B公司、C公司的封閉效率偏低,H公司、J公司的封閉效率非常低→產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增的可能性更高,影響目的產(chǎn)物的擴(kuò)增。 · 部分公司酶的實(shí)測(cè)活性偏低或過(guò)高,說(shuō)明酶活測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確,批間差大。 |
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1)Taq HS的Hot Start效果驗(yàn)證—評(píng)價(jià)方法 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2)Taq HS的Hot Start效果驗(yàn)證—結(jié)果展示 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
· R001的全部結(jié)果都存在非特異性擴(kuò)增,說(shuō)明使用非HS型Taq酶時(shí),非特異性擴(kuò)增產(chǎn)生概率高于HS型PCR酶 · R007第1泳道的非特異性條帶,在第2泳道時(shí)沒(méi)有出現(xiàn),說(shuō)明R007的抗體,可以有效降低非特異性擴(kuò)增 · R007第4泳道,沒(méi)有出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增,說(shuō)明master mix室溫放置24 hr,抗體依然保持了HS作用,操作較慢或樣本較多時(shí),抗體依然保持了活性,對(duì)于IVD Kit研發(fā),這是非常重要的優(yōu)勢(shì)。 |
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本文實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來(lái)自于Takara Biomedical Tech. Co., Ltd. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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頁(yè)面更新:2024-06-17 11:52:43