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合成siRNA定量試劑盒Synthetic siRNA Quantitation Core Kit
品牌	Code No.	產(chǎn)品名稱	包裝量	價格（元）	說明書	數(shù)量
Takara	6142	Synthetic siRNA Quantitation Core Kit	30 Rxns	￥5,112

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*■ 制品內(nèi)容 (30次量)^1**
1. Terminal Transferase Buffer	390 μl
2. Terminal Transferase	30 μl
3. dATP	150 μl
4. Recombinant RNase Inhibitor	30 μl
5. Oligo dT Primer^*2	150 μl
6. RT Buffer	270 μl
7. RT Enzyme Mix	30 μl
8. Universal Primer (10 μM)	120 μl
9. EASY Dilution (for Real Time PCR)	1 ml
10. Control siRNA (20 nM)	10 μl
11. Control Primer (10 μM)	20 μl
1 含 poly dA 加尾反應(yīng)及反轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 30 次反應(yīng)量、Real Time PCR用Universal Primer 120 次反應(yīng)量。 2 本制品專用Oligo dT Primer。

■ 保存

-20℃。

■ 制品說明

在動物或細(xì)胞中siRNA對特定基因敲除效果的驗證，在醫(yī)藥領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。
本制品是對合成siRNA進(jìn)行定量的試劑盒，通過Real Time PCR解析方法，對細(xì)胞、組織、血液等提取的Total RNA樣品中siRNA的殘余量進(jìn)行測定。
siRNA化學(xué)合成時一般在3’末端帶有兩個脫氧胸腺嘧啶(dT)堿基。本試劑盒在3’末端(dT)加上poly(A)尾，再利用特別設(shè)計的Oligo dT Primer進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，即使在Total RNA存在的條件下也能制備與siRNA互補的cDNA。以合成的cDNA為模板，利用TB Green^® Premix Ex Taq Ⅱ (Tli RNaseH Plus)等試劑盒中的嵌合法進(jìn)行Real Time PCR，對合成的siRNA進(jìn)行高靈敏度的定量。
注意：1. 本試劑盒應(yīng)用于3’末端帶有脫氧胸腺嘧啶d(TT)的siRNA的定量。
2. 合成的siRNA 3’末端兩個(dT)堿基以外帶有DNA序列時，可以通過更改Oligo dT Primer序列，使用本試劑盒。
3. 合成的siRNA 3’末端沒有添加(dT)堿基或者3’末端為RNA時，不能使用本試劑盒。

■ 實驗例

小鼠血液中合成siRNA的定量模擬實驗

【方法】

在50 μl小鼠全血(檸檬酸鈉抗凝劑)中分別添加10 amol、1 fmol、100 fmol的Control siRNA后，使用RNAiso Plus(Code No.: 9108)及Dr. GenTLE Precipitation Carrier(Code No.: 9094)制備Total RNA(50 μl)。
使用本制品和TB Green Premix Ex Taq II (Perfect Real Time) 進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)，對Control siRNA進(jìn)行定量檢測。

【結(jié)果】

使用本制品，通過Real Time PCR解析方法，對于添加到小鼠血液中的siRNA進(jìn)行了定量。